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作者：程花蕾;王亚君;邢巍巍;
单位：锦州医科大学附属第一医院;
摘要：目的 本研究旨在探究焦亡相关蛋白在H_2O_2诱导的HEI-OC1细胞氧化应激模型中的表达调控机制及双硫仑对焦亡相关信号通路的影响及其作用机制。方法 本实验使用H_2O_2（或双硫仑/H_2O_2联合双硫仑）处理HEI-OC1细胞，通过细胞计数试剂盒检测对细胞活力的影响；流式细胞术和免疫荧光技术检测各组细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的生成情况；免疫荧光技术检测各组细胞中NLRP3、caspase-1及N-GSDMD等焦亡关键蛋白的表达水平；RT-qPCR检测细胞中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18等焦亡相关基因的mRNA表达水平；扫描电镜观察细胞形态学改变；ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子IL-1β、IL-18的分泌水平。结果 本研究用不同浓度H_2O_2处理HEI-OC1细胞4 h，其半抑制浓度为829.5μmol/L，因此采用800μmol/L进行后续实验。不同浓度双硫仑联合800μmol/L H_2O_2处理HEI-OC1细胞，5μmol/L双硫仑时细胞的活力最高，因此采用5μmol/L双硫仑+800μmol/L H_2O_2进行后续实验。HEI-OC1细胞经H_2O_2处理后，ROS显著增高(P<0.001),NLRP3、caspase-1、N-GSDMD蛋白表达显著增高(P<0.0001)，细胞培养上清中炎症因子IL-1β、IL-18升高(P<0.001),NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18的mRNA表达量升高(P<0.001)，扫描电镜显示细胞出现肿胀，毛细胞上出现孔隙并有大量泡状突出物。而经双硫仑联合H_2O_2处理后，ROS的生成明显降低（P<0.01），焦亡相关蛋白表达显著降低(P<0.05)，细胞培养上清中炎症因子IL-1β、IL-18降低（P<0.01）,NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18 mRNA的表达量降低(P<0.05)，扫描电镜显示细胞上孔隙减少，细胞膜上泡状物减少。结论 H_2O_2能够通过诱导HEI-OC1细胞发生氧化应激反应进而引发细胞焦亡，双硫仑能够通过抑制ROS生成和N-GSDMD膜孔形成，显著减轻H_2O_2诱导的HEI-OC1细胞损伤。
关键词：细胞焦亡;;双硫仑;;N端消皮素D;;过氧化氢;;氧化应激
