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作者:康新华;韩庆彦;毋艳萍;牛琼;赵雯;高军军;
单位:甘肃省动物疫病预防控制中心;
摘要:为建立适用于小反刍兽疫病毒(PPRV)的临床快速检测方法,本研究基于PPRV N基因序列设计并筛选引物与探针,通过优化逆转录-重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)反应体系的温度和时间,联合侧向层析试纸条(LFD)构建RT-RPA-LFD检测方法,并系统评价其性能。结果表明,该方法在42℃反应15 min即可完成扩增,并可通过LFD实现结果的可视化。其灵敏度为10拷贝/μL,与常规RT-PCR灵敏度相当。对山羊传染性胸膜肺炎、绵羊支原体和丝状支原体山羊亚种等其他病原体无交叉,批间和批内重复试验均呈现出理想的检测结果,且临床样本检测结果与荧光RT-PCR检测结果的符合率达100%。综上所述,本研究建立的RT-RPA-LFD检测方法用时短、操作便捷、兼具高灵敏度与强特异性,且重复性好,适用于小反刍兽疫病毒的现场快速检测。
关键词:小反刍兽疫病毒;;重组聚合酶扩增;;侧向层析试纸条;;快速检测
基金资助:甘肃省农业农村厅科技项目(GNKJ-2024-35)