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作者：卢海林;汪文斐;陶文慧;林培翀;陈心春;邓国防;谢水祥;
单位：赣南医科大学基础医学院;深圳国家感染性疾病临床医学研究中心;深圳大学医学部;深圳市第三人民医院肺病二科;
摘要：目的:研究油酸对巨噬细胞清除结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的作用，并进一步探讨其作用机制。方法:使用人单核细胞白血病细胞(THP-1)细胞系诱导的巨噬细胞，加入或不加入油酸(oleic acid, OA)后感染MTB标准株H37Ra,用菌落形成单位(colony-forming unit, CFU)计数及免疫荧光方式检测油酸对巨噬细胞清除MTB的影响。通过RNA-seq筛选出关键靶基因，并采用基因富集分析筛选出相关通路，实时荧光定量PCR验证基因表达。结果:MTB标准株H37Ra感染未经油酸诱导(H37Ra组)巨噬细胞后72 h的菌落计数单位(CFU)中位数(四分位数)为[49×10~4(48×10~4,59×10~4)],明显高于经油酸诱导(OA+H37Ra组)的巨噬细胞的CFU[34×10~4(30×10~4,42×10~4)],差异有统计学意义(U=3.500,P=0.017)。RNA-Seq数据显示，围脂滴蛋白2(recombinant perilipin 2,PLIN2)的表达在OA+H37Ra组明显高于H37Ra组。在油酸诱导的巨噬细胞中，敲低PLIN2基因后的CFU结果显示，在H37Ra感染72 h后，敲低PLIN2组的CFU中位数(四分位数)为86×10~4(78×10~4,96×10~4),明显高于对照空载体组[56×10~4(54×10~4,62×10~4)],差异有统计学意义(U=3.000,P=0.015)。OA+H37Ra组中，PLIN2的相对表达量为3.219±0.298,明显高于H37Ra组的0.555±0.028,差异有统计学意义(t=15.410,P<0.01);OA+H37Ra组中PPARγ的相对表达量为0.666±0.075,明显低于H37Ra组的2.217±0.153,差异有统计学意义(t=14.700,P<0.01);OA+H37Ra组中，ACOX1、HADHA基因的相对表达量分别为1.410±0.124和1.107±0.111,均明显低于H37Ra组的2.476±0.207和3.140±0.240,差异均有统计学意义(t=13.520,P<0.01;t=12.760,P<0.01)。结论:油酸通过脂滴表面蛋白PLIN2调控巨噬细胞的脂肪酸氧化促进巨噬细胞对MTB的清除。
关键词：分枝杆菌,结核;;巨噬细胞;;油酸;;围脂滴蛋白;;基因表达调控,细菌
基金资助：深圳市第三人民医院研究基金(G202205,G2022003,G2022155,24250G1025)~~
