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作者：司安琪;王淑娟;张永强;王筱真;任炜杰;郑龙三;包静月;王志亮;
单位：南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室;中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室;
摘要：为了深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的生物学特性，为血清学诊断技术研究和疫苗研发提供材料，制备了CP312R蛋白的单克隆抗体。将原核表达质粒pGEX-6p-CP312R转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)细胞中，用IPTG诱导CP312R蛋白表达并纯化，利用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定重组蛋白表达产物的抗原性，用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠，在进行4次免疫后，取加强免疫后的小鼠脾脏进行细胞融合，经阳性克隆筛选后，获得了2株能够稳定分泌抗CP312R蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blot和间接免疫荧光(IFA)等试验对所获得的单克隆抗体的特异性进行鉴定，Western blot结果显示，制备的2株单克隆抗体均能与CP312R蛋白发生特异性反应；IFA结果显示，2株单克隆抗体均能与ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞(PAM)产生特异性绿色荧光。综上，本研究制备的2株单克隆抗体，为非洲猪瘟血清学诊断方法及疫苗的研究奠定了基础。
关键词：非洲猪瘟病毒;CP312R蛋白;单克隆抗体;原核表达
基金资助：国家重点研发计划项目(2022YFD1800500)
