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作者：刘磊;褚钏琛;李瑞;丁凡;石雨鹭;王哲;尹茉莉;王会岩;
单位：吉林医药学院/吉林省抗体工程科技协同创新中心;吉林医药学院检验学院;
摘要：旨在真核表达牛妊娠相关糖蛋白20 (bovine pregnancy associated glycoproteins 20,BoPAG20),并对蛋白质结构与功能进行预测。参考GenBank中BoPAG20基因密码子进行优化并合成，构建真核表达载体pcMV3-BoPAG20,转染至293F细胞中进行瞬时表达。SDS-PAGE和Western blot检测表达效果，Ni~(2+)亲和磁珠纯化蛋白，用纯化后的蛋白免疫小鼠验证免疫原性，并对BoPAG20结构与功能进行预测分析。结果：优化后的BoPAG20基因长度为1 143 bp,编码380个氨基酸残基，密码子适用指数(CAI)由原来的0.77提高到0.96,GC含量由48.91%提高到55.29%;成功构建了pcMV3-BoPAG20真核表达载体，转染至293F细胞中成功表达，获得BoPAG20蛋白相对分子量约为58 kDa;纯化后BoPAG20蛋白免疫小鼠，34 d后测定血清效价达到1∶10~5;BoPAG20蛋白无跨膜螺旋区，为分泌性蛋白，信号肽是N端15个氨基酸，存在6个糖基化位点(Ser~(36)、Ser~(56)、Ser~(57)、Ser~(76)、Ser~(80)、Thr~(115))和8个B细胞抗原表位，二级结构由α-螺旋(18.68%)、无规则卷曲(45%)和延伸链(30.79%),无β-转角；与BoPAG20互作蛋白包括β-淀粉样蛋白(APP)和β-淀粉样前体样蛋白2(APLP2)。本研究成功表达并纯化出BoPAG20蛋白，证实其具有良好的免疫原性，并进行了结构和功能预测，为该蛋白的结构和功能研究奠定基础。
关键词：真核表达;牛妊娠相关糖蛋白;密码子;结构与功能预测
基金资助：吉林省科技发展计划项目(20230203099SF,20210204186YY); 吉林省教育厅科学技术研究规划项目(JJKH20210504KJ,JJKH20230535KJ); 吉林市科技创新发展计划项目(201830853); 吉林医药学院博士启动基金项目(JYBS2021001LK); 吉林省大学生创新创业训练计划项目(S202113706038)
