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作者：刘恋;刘佳丽;黄永熙;余捷;汤锋;白若男;刘满;朱君;郭利伟;刘国平;杨小林;
单位：长江大学动物科学技术学院;
摘要：旨在通过脂多糖(LPS)建立RAW264.7细胞与BALB/c小鼠炎症模型进行体内外试验，探讨熊果酸对LPS诱导炎症的保护作用。体外采用MTT法测定熊果酸和LPS对RAW264.7细胞活力的影响，中性红测试熊果酸对LPS刺激RAW264.7细胞吞噬能力的影响，Griess法测定NO释放水平；荧光定量PCR(RT-qPCR)测定JAK激酶1(JAK1)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路和炎症因子mRNA表达水平。BALB/c小鼠灌胃熊果酸分为25 mg/kg的低剂量组(UA-L)、50 mg/kg的中剂量组(UA-M)和100 mg/kg的高剂量组(UA-H),每只小鼠200μL/d,灌胃7 d,腹腔注射LPS诱导炎症反应后采集脾脏，计算脾脏指数，使用流式细胞术测定脾脏T细胞分化和Th17/Treg平衡，RT-qPCR方法验证α肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1、JAK1和STAT3的mRNA表达水平。结果：熊果酸在12.5μg/mL范围内对细胞活力无影响(P>0.05),LPS浓度为1μg/mL时，细胞存活率为54.55%;LPS刺激后RAW264.7细胞吞噬能力显著下降(P<0.05),NO释放水平显著上升(P<0.05);熊果酸干预后，细胞吞噬能力呈剂量依赖式上升，NO释放水平下降。RT-qPCR结果表明，RAW264.7细胞经LPS刺激后，一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1、IL-6、 TNF-α、JAK1和STAT3的mRNA表达水平均显著上升(P<0.05);熊果酸干预后，上述因子mRNA表达水平均显著下降(P<0.05)。体内试验结果表明，腹腔注射LPS后，小鼠脾脏指数显著高于空白对照组(P<0.05),CD4~+/CD8~+和Th17/Treg细胞出现失衡；不同剂量熊果酸干预后脾脏指数均显著降低(P<0.05),对小鼠CD4~+和CD8~+细胞分化具有明显促进作用，同时改善Th17/Treg失衡；腹腔注射LPS的小鼠脾脏IL-1、 TNF-α、JAK1和STAT3的mRNA表达水平均显著上升(P<0.05),提前饲喂熊果酸能改善这一情况。综上，熊果酸通过调节炎症因子、改善T细胞分化失衡，从而降低由LPS诱导的RAW264.7细胞和小鼠的炎症反应。
关键词：熊果酸;脂多糖;炎症;JAK1/STAT3;Th17/Treg
基金资助：国家自然科学青年基金资助项目(31602099); 湖北省重点研发计划项目(2023BBB045)
