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作者：柴书军;杨苏珍;刘运超;冯华;魏蔷;王方雨;金前跃;张改平;
单位：河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州大学;
摘要：为了制备猪细小病毒(PPV)4型Cap蛋白单克隆抗体(mAb)并鉴定其抗原表位，试验采用原核表达的Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠，将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合，通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、血凝抑制(HI)和免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选阳性克隆，最终获得2E7、4D6和5C9这3株特异性杂交瘤细胞株；然后用mAb对Cap蛋白多肽进行ELISA检测，鉴定分析其抗原表位。结果显示：4D6和5C9 mAb识别表位为线性表位，分别为~( 387)RRQDN~(391)和~(578)QRKE~(581),而2E7 mAb识别的表位为构象表位；通过对Cap蛋白3D结构定位分析，~(387)RRQDN~(391)和~(578)QRKE~(581)抗原表位位于蛋白表面，且在PPV4亚型中高度保守，而与猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)和猪博卡病毒(PBoV)基因序列同源性低。本研究为PPV4诊断试剂的开发和新型疫苗的研制提供了参考。
关键词：猪细小病毒4型;单克隆抗体;抗原表位
基金资助：国家重点研发计划项目(2017YDF0501103); 河南省农业科学院自主创新项目(2023ZC085,2023ZC087,2024ZC099)
