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作者：潘俊慧;王素春;禹兰平;周凯钰太;魏世萌;祁倩;李超;隋金钰;康京丽;王楷宬;
单位：中国动物卫生与流行病学中心;农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方);
摘要：旨在建立针对禽流感病毒(AIV)的实验室快速分子检测方法。构建重组慢病毒作为分子检测方法中的阳性对照品，采用PCR扩增技术获得AIV M基因的保守区片段，并构建pLVX-M-IRES-ZsGreen1重组慢病毒穿梭载体；将鉴定成功的重组穿梭质粒与骨架质粒pMD2.G和psPAX2共转染293T细胞，获得携带AIV M基因保守区的重组慢病毒；将重组慢病毒感染293T细胞，观察其荧光表达情况，收集、浓缩病毒液并测定其滴度；用AIV实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法检测M基因。结果表明：携带AIV M基因的重组慢病毒成功拯救，且其病毒滴度高、安全性强，可作为分子检测方法的阳性对照标准品。综上，本研究成功构建了AIV M基因的重组慢病毒，可高效包装出含有M基因保守区的慢病毒颗粒，为后续AIV分子检测试剂盒的研制提供参考。
关键词：禽流感病毒;M基因;293T细胞;重组慢病毒
基金资助：国家重点研发计划项目(2022YFD1800500)
