来源：期刊VIP网 时间：
作者：徐之恒;孙少辉;董友富;唐伟明;徐孝宙;邢军;李豪;孙刘妹;万进;王聪;张振东;
单位：扬州大学医学院(转化医学研究院);中牧实业股份有限公司;江苏科技大学生物技术学院;江苏农林职业技术学院;
摘要：为了准确、特异、高效地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒2型(PRRSV2),本研究根据GenBank上登录的PRRSV2不同谱系流行毒株的ORF6基因序列，选取保守区域设计合成了1对特异性检测引物和1条MGB探针，经优化退火温度、引物和探针比例等反应条件及敏感性、特异性、重复性试验，建立了检测PRRSV2的TaqMan MGB荧光定量PCR方法。结果：以猪繁殖与呼吸综合征病毒1型(PRRSV1)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)及猪细小病毒(PPV)等阳性核酸为模板，均无扩增；对标准质粒的最低检测下限为1×10~1 copies/μL,建立的标准曲线呈现良好的线性关系，相关系数R~2为0.994;稳定性和重复性好，批内和批间变异系数均小于1.78%。应用该方法对保留的30份临床阳性样品进行检测，结果阳性100%,Ct值在22～36间。综上，本研究建立的TaqMan MGB荧光定量PCR方法可用于临床和实验室中PRRSV2的快速检测，为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供了技术支持。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒;ORF6基因;TaqMan MGB;qPCR
基金资助：江苏省基础研究计划(自然科学基金)青年基金项目(BK20201005); 江苏农林职业技术学院校企合作项目(2020kj021)
