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作者：史雪盟;王靖仪;陈帅武;张鑫彤;温鑫;毛琳;许君;
单位：河南农业大学生命科学学院;
摘要：【目的】通过表达重组α/β水解酶超家族17A(α/β-hydrolase domain-containing 17A,ABHD17A),验证其在蛋白质棕榈酰化修饰及病毒感染过程中的调控作用，为动物病毒性疾病的治疗提供理论依据及新思路。【方法】原核诱导重组ABHD17A表达，通过酰基-聚乙二醇交换法(Acyl-PEGyl exchange gel-shift, APEGS)及实时荧光定量PCR、免疫印迹等技术检测重组ABHD17A对N-Ras棕榈酰化修饰以及乙脑病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)感染的影响。【结果】成功将abhd17a编码序列克隆至pGEX-4T-1原核表达载体，将其转化入BL21(DE3)大肠杆菌诱导表达，发现在22℃、1 mmol·L~(-1)异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside, IPTG)诱导可得到高浓度的可溶性重组ABHD17A。利用亲和层析纯化出重组ABHD17A,经考马斯亮蓝染色及免疫印迹确认了该蛋白的特异性表达。将重组ABHD17A与表达有Flag-N-Ras的HEK293细胞裂解液在4℃孵育12 h,借助APEGS法检测N-Ras的棕榈酰化，结果显示，重组ABHD17A显著下调N-Ras棕榈酰化修饰水平，表明重组ABHD17A在体外可发挥去棕榈酰化酶的作用。将重组ABHD17A孵育HEK293细胞24 h后感染JEV,24 h后采用实时荧光定量PCR及免疫印迹法分别检测JEV mRNA及蛋白水平，发现孵育重组ABHD17A能显著抑制JEV感染，参与免疫调控。【结论】证实了纯化的重组ABHD17A可特异性去棕榈酰化N-Ras,并抑制JEV感染。
关键词：ABHD17A;蛋白表达纯化;酰基-聚乙二醇交换法;棕榈酰化修饰;病毒感染
基金资助：国家自然科学基金项目(32300140,U1804108); 河南省自然科学基金项目(232300421157); 河南省科技攻关项目(232102310305); 河南农业大学大学生创新创业训练项目(2023CX122)
