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作者：赵君;张震;董飞宇;徐轶凡;陈红歌;
单位：河南农业大学生命科学学院;河南科技大学应用工程学院;
摘要：【目的】优化黑曲霉糖化酶工业菌株CBS 513.88原生质体制备条件，促进其基础研究和分子改造。【方法】通过考察酶解液成分与比例、酶解条件、渗透压稳定剂和菌体生长条件对黑曲霉CBS 513.88原生质体制备的影响，优化其制备条件，并通过聚乙二醇介导的原生质体转化方法测试原生质体的转化效率。【结果】适合黑曲霉CBS 513.88原生质体制备的材料为改良ME培养基培养10 h的菌丝，酶解条件为在10 g·L~(-1)溶壁酶Glucanex?和10 g·L~(-1)蛋清溶菌酶的破壁酶溶液(pH值5.8)33℃、110r·min~(-1)酶解1.5 h,渗透压稳定剂为0.7 mol·L~(-1) KCl+0.27 mol·L~(-1) CaCl_2。在此制备条件下，原生质体悬液含量最高可达2×10~7个·mL~(-1);原生质体再生培养基为添加0.7 mol·L~(-1) KCl的ME培养基，其最大再生率为52%;转化率最高为206个·μg~(-1) DNA(质粒),阳性率为94.4%。【结论】通过对黑曲霉CBS 513.88原生质体制备条件的优化，建立短时高效的原生质体介导遗传转化体系。
关键词：黑曲霉CBS 513.88;;原生质体制备;;原生质体再生;;原生质体介导转化;;遗传转化体系
基金资助：国家自然科学基金项目(32171476)
