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作者：周颖;陈忠伟;段群棚;程珂;林昌华;许艺兰;张胜斌;覃国喜;许心婷;杨讯业;秦毅斌;赵硕;全琛宇;陈婷婷;徐悦;何颖;卢冰霞;
单位：广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室;广西大学动物科学技术学院;广西农垦永新畜牧集团金光有限公司;广西农垦永新畜牧集团西江有限公司;
摘要：为了明确猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)体外感染猪肺泡巨噬细胞是否会诱导细胞发生氧化应激反应，并初步揭示相关机制，试验分别用5×10~6,1×10~7,2×10~7,5×10~7 CCU/mL Mhp感染猪肺泡巨噬细胞，以未感染Mhp的细胞为对照，并分别于第6,12,18,24,36小时收集细胞，检测氧化应激相关指标[活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平、一氧化氮(nitric oxide, NO)浓度、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量、还原型一氧化氮合成酶(induciblenitric oxide synthase, iNOS)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase, T-SOD)活性];根据氧化应激相关指标的测定结果，选择氧化应激水平最明显的感染浓度和时间点，采用荧光定量PCR方法检测氧化应激通路相关因子{核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor2, Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1)、磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1[NAD(P)H:quinoneoxidoreductase-1, NQO1]、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)}的mRNA表达水平，并采用Western-blot方法检测上述因子的蛋白表达水平。结果表明：与正常细胞比较，4个浓度的Mhp感染细胞中ROS水平在第6,12,18,24,36小时均显著升高(P<0.05);5×10~6CCU/mL Mhp感染细胞的NO浓度仅在第24小时显著升高(P<0.05),1×10~7 CCU/mL Mhp感染细胞的NO浓度在第6,12,18小时显著升高(P<0.05),2×10~7 CCU/mL和5×10~7 CCU/mL Mhp感染细胞的NO浓度在第6,12,18,24小时显著升高(P<0.05);5×10~(6 ) CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量仅在第36小时显著升高(P<0.05),1×10~7 CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量在第24,36小时显著升高(P<0.05),2×10~7 CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量在第6,12,18,36小时显著升高(P<0.05),5×10~7 CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量在第6,18,24小时显著升高(P<0.05);5×10~6 CCU/mL Mhp感染细胞的iNOS活性在第6,12,24,36小时显著升高(P<0.05),1×10~7 CCU/mL Mhp感染细胞iNOS活性在第6,12,18,24,36小时均显著升高，2×10~7,5×10~7CCU/mL Mhp感染细胞iNOS活性在第12,18,24,36小时显著升高(P<0.05);4个浓度Mhp感染细胞的T-SOD活性在第6,12,24,36小时均差异不显著(P>0.05);2×10~7CCU/mL Mhp感染细胞第18小时Nrf2 mRNA和蛋白的表达水平均差异不显著(P>0.05),Keap1 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05)但蛋白的表达水平差异不显著(P>0.05),NQO1 mRNA的表达水平差异不显著(P>0.05)但蛋白的表达水平显著提高(P<0.05),HO-1 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05)但蛋白的表达水平显著提高(P<0.05)。说明Mhp感染猪肺泡巨噬细胞后可能激活Nrf2-Keap1信号通路，引起氧化应激反应。
关键词：猪肺炎支原体;;氧化应激;;核因子E2相关因子2;;活性氧;;Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1;;血红素加氧酶-1
基金资助：广西现代农业产业技术体系生猪产业创新团队项目(nycytxgxcxtd-2023-15-02);; 南宁市科学研究与技术开发计划项目(20232039);; 广西基本科研业务费专项(桂科专项23-4);; 广西畜牧产业科技先锋队项目(桂农科盟202409-01-3);; 广西农业科技自筹经费项目(Z2023033;Z202222)
