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作者：温和;蔡诚诚;李罗品;刘石锋;梁晓;王强;王西瑶;
单位：四川农业大学西南作物基因资源发掘与利用国家重点实验室;四川农业大学农学院马铃薯研究与开发中心;四川省农业科学院作物研究所;
摘要：StSN2属于马铃薯(Solanum tuberosum L.)Snakin/GASA(gibberellic acid-stimulated arabidopsis)蛋白家族，其N端具有信号肽，C端具有12个保守的半胱氨酸残基，主要在植物生长发育和逆境胁迫响应方面发挥重要调控作用。为了明确StSN2蛋白N端信号肽区域对其蛋白亚细胞定位及蛋白互作的影响，本研究首先通过信号肽预测及PCR扩增，获得含信号肽的StSN2基因片段和N端信号肽缺失的StSN2△_(SP)片段，长度分别为315 bp和243 bp。其次，通过酶切连接方法将StSN2△_(SP)基因片段连接在亚细胞定位载体上，获得融合蛋白YFP-StSN2△_(SP)。瞬时表达实验结果发现，N端信号肽缺失后的StSN2△_(SP)蛋白的亚细胞定位发生了变化，只定位在细胞核。最后通过同源重组方式将StSN2以及StSN2△_(SP)分别构建到酵母诱饵载体上，并与pGADT7-SnRK1α进行酵母双杂交实验。结果显示，StSnRK1α与StSN2共转化酵母细胞后，其细胞不能在四缺培养基中生长，而StSnRK1α与N端信号肽缺失的StSN2△_(SP)共转化酵母细胞后，其细胞能在四缺培养基中生长并显色，说明StSN2信号肽缺失后对其亚细胞定位及蛋白互作均有影响。本研究为StSN2蛋白的生物学功能研究提供了理论依据，为进一步完善该基因在马铃薯块茎休眠的功能研究奠定了实验基础。
关键词：马铃薯;StSN2;信号肽;亚细胞定位;酵母双杂交
基金资助：国家现代农业技术体系四川薯类创新团队项目(SKL-ZY202203); 西南作物基因资源与利用国家重点实验室“生物育种”揭榜挂帅项目(sccxtd-2023-09)共同资助
