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作者：刘海雯;徐玲;范玉;包桂英;陈俊杰;张天承;徐晴晴;赵鸿雁;朴东日;田国忠;任锋;姜海;
单位：内蒙古科技大学包头医学院公共卫生学院;首都医科大学附属北京佑安医院,北京肝病研究所;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室;通辽市蒙医研究所;
摘要：目的 本研究旨在建立一种基于微滴式数字聚合酶链式反应（ddPCR）的检测方法，能够实现对布鲁氏菌病（布病）患者血液中布鲁氏菌核酸的定量与精准检测。方法 以布鲁氏菌Bcsp31基因为靶基因，设计引物与探针并构建pUC57-Bcsp31重组阳性质粒，评价ddPCR方法检测布鲁氏菌的灵敏度、重复性与特异度。此外，收集疑似布病患者血液120份，采用ddPCR方法对样本中布鲁氏菌DNA载量进行定量检测。结果 本研究建立的ddPCR检测布鲁氏菌的方法具有很高的灵敏性，最低检出限为10~0拷贝/μL，并且对布鲁氏菌的检测呈现出良好的特异性与准确性。120份血液样本中，ddPCR方法检出阳性103份，实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）方法检出阳性52份。105份抗体阳性样本中，ddPCR方法与qPCR方法分别检出阳性93份和51份，阳性率分别为88.57%和49.52%。15份抗体阴性样本中，两种方法分别检测出阳性12份和1份。结论 本研究建立了一种基于ddPCR方法的高灵敏度、高特异度的检测布鲁氏菌的方法，能够实现布病患者血液样品中布鲁氏菌核酸的定量与精准检测。尤其对于抗体阴性的疑似患者早期布病筛查具有重要意义。
关键词：布鲁氏菌;;微滴式数字聚合酶链式反应;;定量检测
基金资助：布鲁氏菌两种检测方法的验证（No.33021）;; 北京市医管局“登峰”人才计划（No.DFL20221503）;; 高层次公共卫生技术人才建设项目（No.学科带头人-02-13）;; 2023年度北京市自然科学基金-昌平创新联合基金（No.L234046）;; 内蒙古自治区卫生健康委员会科研计划项目（No.202201566）~~
