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作者：王文婷;张晨燕;赵可冉;丁建华;荆恩荣;杨超;
单位：忻州师范学院生物系;福建农林大学园艺学院;
摘要：【目的】双组分系统VfmH/VfmI与Dickeya属病原菌的致病因子和致病过程有关。研究D.fangzhongdai Onc5菌株vfmH和vfmI基因的克隆、原核表达及蛋白纯化，为明确VfmH/VfmI的调控机理提供依据。【方法】采用RT-PCR方法扩增D.fangzhongdai Onc5菌株，获取vfmH和vfmI基因开放阅读框(ORF)。随后将目的基因克隆至原核表达质粒pET-32a,构建重组质粒pET-32a-VfmH和pET-32a-VfmI,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后，利用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白，并利用Ni~(2+)-NTA琼脂糖亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。【结果】D.fangzhongdai Onc5菌株vfmH和vfmI的ORF大小分别为1 401 bp和1 320 bp,分别编码466个和439个氨基酸；同源性分析表明，其氨基酸序列与Dickeya属其他菌种的vfmH和vfmI序列具有很高的相似性；SDS-PAGE和Western blot鉴定结果表明，添加0.5 mmol·L~(-1) IPTG,可诱导重组质粒pET-32a-VfmH转化株和pET-32a-VfmI转化株表达产生大量携带His-tag的融合重组蛋白；同时，成功纯化出目的蛋白。【结论】首次克隆出D.fangzhongdai中双组分系统基因vfmH和vfmI,并成功纯化出VfmH和VfmI蛋白。
关键词：软腐病;;双组分系统;;狄克氏菌;;vfmH基因;;vfmI基因;;原核表达
基金资助：山西省科技厅基础研究计划项目(20210302124516);; 山西省高校科技创新计划项目(2021L462)
