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作者：郑炜彬;胡秋怡;杨李;谭梓瀚;张玉璇;柯野;
单位：韶关学院生物与农业学院;
摘要：【目的】探究异常球菌RM菌株高表达的脂肪酶基因(LIP)异源表达及其重组脂肪酶(rLIP)的酶学性质，为产脂肪酶微生物菌株的筛选提供新的来源参考，以及为低温脂肪酶的开发应用提供一定的理论依据。【方法】对异常球菌RM菌株的基因组及转录组进行测序分析，筛选出表达量高的脂肪酶基因，重组至毕赤酵母GS115菌株中进行诱导表达；对rLIP的氨基酸残基序列和3-D结构进行分析，并探究其酶学性质。【结果】RM菌株表达了6个脂肪酶基因，其中只有1个基因编码胞外脂肪酶。序列比对分析表明，LIP与脂肪酶(国际蛋白结构数据库编号：5ah0.1.A)的序列一致性最高，为43.84%。LIP具有低温脂肪酶的催化三联体(Ser-Asp-His)和α/β水解酶折叠的典型结构特征。LIP基因在毕赤酵母GS115菌株中成功获得了表达。rLIP的最适底物为对硝基苯月桂酸酯和对硝基苯棕榈酸酯；rLIP最适反应温度为30℃,低于30℃有较高催化活性和稳定性；rLIP最适pH为8.0,pH为7.0～9.0时能保持50%以上的酶活性；Mg~(2+)对rLIP活性的提高有一定的促进作用。【结论】异常球菌RM菌株分泌的LIP是一种低温碱性脂肪酶，具有较强的稳定性和底物特异性。
关键词：脂肪酶基因LIP;;异常球菌RM菌株;;蛋白结构预测;;克隆表达;;酶学性质
基金资助：广东省基础与应用基础研究项目(2019A1515011089);; 广东省普通高校重点科研项目(2023ZDZX4055);; 韶关学院省级大学生创新创业训练计划项目(S202310576024);韶关学院第二十二批教育教学改革研究项目(SYJY20211115);; 韶关学院2022年度校级“质量工程”建设项目(27)
