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作者：吴敏;廖扬振;皮继岚;刘尚煜;魏渊;欧阳臻;
单位：江苏大学药学院;江苏大学食品与生物工程学院;
摘要：本研究在已有桑遗传转化体系的基础上对其进行优化，以提高转化效率，为后续桑基因功能研究及分子育种奠定基础。首先分别从发根农杆菌种类、外植体类型、预培养时间、侵染时间和共培养时间五个方面对农杆菌介导的桑遗传转化体系进行优化，再构建MaCYP90A-pBI121质粒转入农杆菌诱导发根以验证优化体系的稳定性。结果表明，优化后的桑遗传转化条件为：采用OD_(600)为0.6的农杆菌LBA9402菌液侵染预培养2 d的无菌桑苗真叶10 min,共培养时间为2 d。在此优化条件下，毛状根诱导率可达到84.51%。同时利用该体系将重组质粒MaCYP90A-pBI121转化至桑叶中，经荧光定量PCR分析，阳性转基因毛状根中MaCYP90A基因表达量为空白对照的39.97倍。综上，本研究成功对已有桑遗传转化体系进行了优化，毛状根诱导率相比优化前(30.21%)提高了1.8倍，可为后续桑基因功能研究、次生代谢物合成途径解析以及分子育种提供技术支撑。
关键词：桑;;遗传转化体系;;发根农杆菌;;毛状根诱导;;转基因
基金资助：国家自然科学基金项目“桑叶DNJ类多羟基生物碱生物合成途径中关键羟基化过程解析”(82274040)、“桑叶DNJ类多羟基生物碱生物合成关键酶基因挖掘和功能研究”(81872961)
