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作者：朱在师;黄泽灵;陈俊名;徐波;陆斌杰;陈华;段星星;李宇卫;沈晓峰;
单位：南京中医药大学附属苏州市中医医院;苏州市吴门医派研究院骨伤研究所;
摘要：目的 基于河马（Hippo）-Yes相关蛋白（YAP）/带有PDZ结合基序的转录共激活因子（TAZ）信号通路探讨吴门枳壳甘草汤延缓椎间盘退变的可能作用机制。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、枳壳甘草汤低剂量组、枳壳甘草汤高剂量组、枳壳甘草汤高剂量+抑制剂组，每组10只。假手术组大鼠采用21G针头在尾部Co6/7/8节段穿刺皮肤和肌肉（深度约为2 mm），不损伤椎间盘，其余各组大鼠在尾部Co6/7/8节段用21G针头穿刺尾椎间盘5 mm建立椎间盘退变大鼠模型。造模1周后，枳壳甘草汤低、高剂量组分别予6.24、12.24 g/（kg·d）枳壳甘草汤灌胃，枳壳甘草汤高剂量+抑制剂组大鼠给予12.24 g/（kg·d）枳壳甘草汤灌胃后，按10 mg/kg腹腔注射YAP/TAZ抑制剂Verteporfin，假手术组与模型组大鼠予5 ml/（kg·d）生理盐水灌胃。灌胃每日1次，腹腔注射隔日1次。各组均连续干预4周后，采用HE染色、番红O-固绿染色及甲苯胺蓝染色观察大鼠尾椎间盘病理改变；免疫组化法检测椎间盘髓核组织聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、基质金属蛋白酶3 (MMP3)表达；Tunel荧光染色检测髓核组织细胞凋亡，计算凋亡率；Western blot法检测髓核组织中Hippo-YAP/TAZ信号通路[包括YAP、磷酸化Yes相关蛋白（p-YAP）、磷酸化20样激酶1/2(p-MST1/2)、带有PDZ结合基序的磷酸化转录共激活因子（p-TAZ）]及凋亡相关蛋白[包括剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Cleaved Caspase 3）、肿瘤基因P53 (P53)、B淋巴细胞瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）]水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠椎间盘发生明显退行性改变，椎间盘髓核组织Aggrecan、Bcl-2、YAP蛋白水平降低，p-MST1/2、p-YAP、p-TAZ、P53、Bax、Cleaved Caspase 3、MMP3蛋白水平及细胞凋亡率均上升（P<0.01）。与模型组比较，各药物干预组椎间盘退变均得到一定恢复，Aggrecan、Bcl-2、YAP蛋白水平均升高，p-MST1/2、p-YAP、p-TAZ、P53、Bax、Cleaved Caspase 3、MMP3蛋白水平及细胞凋亡率均降低（P<0.05或P<0.01）。与枳壳甘草汤低剂量组比较，枳壳甘草汤高剂量组大鼠椎间盘退变恢复更显著，p-MST1/2、p-YAP、p-TAZ、P53、Bax、Cleaved Caspase 3、MMP3蛋白水平及细胞凋亡率降低，Aggrecan、Bcl-2、YAP蛋白水平升高（P<0.05或P<0.01）。与枳壳甘草汤高剂量组比较，枳壳甘草汤高剂量+抑制剂组大鼠椎间盘退变恢复程度降低，p-MST1/2、p-YAP、p-TAZ、P53、Bax、Cleaved Caspase 3、MMP3蛋白水平及细胞凋亡率升高，Aggrecan、Bcl-2、YAP蛋白水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论 枳壳甘草汤可能通过抑制椎间盘髓核组织YAP磷酸化，维持Hippo-YAP/TAZ信号通路功能，降低髓核细胞凋亡，从而延缓椎间盘退变。
关键词：椎间盘退变;;细胞凋亡;;Yes相关蛋白;;带有PDZ结合基序的转录共激活因子;;枳壳甘草汤
基金资助：国家自然科学基金（82174399）;; 江苏省中医药科技发展计划（ZD202230）;; 苏州市临床重点病种诊疗技术专项（LCZX202320）;; 苏州市科技发展计划（SKYXD2022053、SKYD2023150）;; 江苏省医学重点学科和医学重点实验室建设单位（苏卫科教[2022]17号）
