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作者：许协宇;袁峰;李连涛;王能颖;宗丽瑶;路荣梅;温俊平;梁继兴;
单位：福建医科大学省立临床医学院;福州大学附属省立医院内分泌科;
摘要：目的 采用化学遗传学技术选择性激活雌鼠下丘脑弓状核（arcuate nucleus, ARC） Kisspeptin神经元以研究其在骨代谢方面的作用。方法 采用双侧卵巢切除（ovariectomy, OVX）构建绝经后骨质疏松小鼠模型，将8～10周龄杂合型Kiss1-CreGFP雌鼠，按手术类型（OVX/SHAM）、病毒类型[人毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3亚型（Gq蛋白偶联型）（human muscarinic acetylcholine receptor M3 subtype(Gq-coupled), hM3D(Gq)/空载]、药物类型[（氯氮平-N-氧化物（clozapine-N-oxide, CNO）/生理盐水（normal saline, NS）]三因素随机分为6组：Cre-OVX-hM3-CNO组、 Cre-OVX-hM3-NS组、 Cre-SHAM-hM3-CNO组、 Cre-SHAM-hM3-NS组、 Cre-OVX-空载-CNO组、 Cre-OVX-空载-NS组，另设2组野生型对照：Control-OVX、 Control-SHAM。通过脑立体定位技术对小鼠双侧下丘脑注射腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）-EF1α-DIO-hM3D(Gq)-mCherry，使小鼠表达hM3D(Gq)，在饮用水中加入CNO，通过CNO和hM3D(Gq)受体的结合以激活Kisspeptin神经元。造模完成后，取小鼠全脑，进行冰冻切片和免疫荧光，以评估病毒的感染和表达情况；对小鼠股骨使用micro-CT扫描并进行三维图像重建和数据分析，同时进行骨组织切片和苏木素伊红（hematoxylin-eosin, HE）病理染色，以评估下丘脑ARC部位Kisspeptin神经元的激活对雌鼠骨量和骨髓腔脂肪细胞的影响。结果 与Control-SHAM组小鼠相比，Control-OVX组雌鼠骨量减少，骨体积分数（bone volume/total volume, BV/TV）降低（P<0.01）、骨小梁数量（trabecular number, Tb. N）减少（P<0.001），骨小梁分离度（trabecular separation, Tb. Sp）升高（P<0.01）；股骨远端骨小梁和骨髓细胞分布稀疏，骨髓腔中脂肪细胞数量增多。在Kiss1-CreGFP小鼠双侧下丘脑注射AAV-EF1α-DIO-hM3D(Gq)-mCherry, 3周后病毒成功感染并表达相应受体。Cre-OVX-hM3-CNO组骨量减少，骨髓腔中脂肪细胞增多，BV/TV降低（P<0.01）、 Tb. N减少（P<0.01）, Tb. Sp升高（P<0.05）。结论 雌鼠下丘脑ARC部位的Kisspeptin神经元对骨骼稳态起负性调控作用。
关键词：化学遗传学;;Kisspeptin神经元;;女性;;骨质疏松症
基金资助：福建省自然科学基金(2020J011081,2021J01381)
