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作者：高振涛;高斌;张瑞华;徐彤;李旭冬;
单位：济宁市任城区畜牧兽医事业发展中心;河北北方学院动物科技学院,预防兽医学重点实验室;
摘要：为了解H9N2亚型禽流感病毒（AIV）的遗传进化规律、分子变化特征和潜在的跨种传播可能性，本试验对2023—2024年采集自山东省境内养殖场的病鸡肺脏病料进行病毒的分离鉴定、全基因组测序、同源性分析、遗传进化分析、分子特征和进化分析，利用反向遗传操作技术构建亲本毒株（SD11、SD341）和重组毒株（re＿SD341），将重组毒株PA基因中携带的宿主适应性位点突变为禽源模式（PA-R356K/N409S），检测3株毒株在不同宿主细胞中的复制能力，并进一步检测SD341和re＿SD341毒株对小鼠的致病能力。结果显示，从54份病料中分离获得2株H9N2亚型AIV,2株分离株与2000年之后国内疫苗株同源性较高，核苷酸相似性达90%以上；HA基因遗传进化分析结果显示，2株分离毒株均属于B分支中的B4.7.2分支，且8个基因片段均与一些人源分离毒株亲缘关系较近，其中HA、PB1、PB2和PA基因与一些人源分离毒株的核苷酸相似性超过90%；分子特征分析结果显示，2株分离毒株HA蛋白裂解位点均为PSRSSR↓GL，符合2020年左右B分支中流行毒株分子特征；与早期代表毒株相比，NA蛋白茎部均有缺失且在第368位均增加1个新的潜在糖基化位点；2株毒株的HA、PB1、PB2和PA蛋白均携带宿主适应性突变位点，其中PA蛋白发生K356R和S409N适应性突变；生物学特性验证结果显示，与re＿SD341重组毒株相比，SD341亲本毒株在人非小细胞肺癌细胞系（A549）中的复制能力更强（P <0.000 1），并且在一定时间内可导致小鼠的体重明显下降。结果表明，本试验分离的2株H9N2 AIV毒株均为低致病性毒株，病毒发生不同程度的变异进化，其中一些病毒蛋白包含哺乳动物适应性突变，增加了其跨种传播的风险，本试验结果为我国H9N2亚型AIV的进化提供了参考，为禽流感综合防控和公共卫生安全提供了数据支撑。
关键词：H9N2;;禽流感病毒;;遗传进化;;跨种传播
基金资助：河北省现代农业产业体系建设专项资金（HBCT2024270205）;; 河北省自然科学基金资助项目（C2023405005）
