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作者：崔超杰;张慧;刘春菊;魏荣;张永强;崔进;戈胜强;李金明;蔡玉梅;王志亮;
单位：中国动物卫生与流行病学中心;山东农业大学动物医学院山东省人兽共患病重点实验室;青岛市现代生物工程及动物疫病研究重点实验室;农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方);
摘要：尼帕病毒（Ni V）作为高致死率的人兽共患病病原，受到世界各国广泛关注。为了获得快速灵敏的检测方法和安全稳定的阳性标准品，本试验将Ni V N和L基因同时插入假病毒转移质粒PLJM-GFP中，与包装质粒共转染人胚胎肾（HEK293T）细胞，收集并浓缩病毒液，测定转染后48和72 h收集的假病毒滴度，于透射电子显微镜下观察假病毒形态，并进行PCR扩增和测序鉴定。以世界动物卫生组织推荐的Ni V检测引物对包装的假病毒进行验证，应用实时荧光定量PCR(q PCR）技术对不同标准和文献中的4对Ni V检测引物进行特异性和敏感性分析，并对构建的Ni V假病毒进行均一性试验、短期稳定性试验和抗RNase A降解试验。结果显示，转染后48和72 h收集的假病毒滴度分别可达2.72×10~5和3.47×10~4 IU/m L，电子显微镜下假病毒呈圆形、有囊膜的颗粒。测序结果显示，Ni V假病毒核酸中成功插入N和L基因片段；4对Ni V检测引物特异性良好，均可用于Ni V检测，其中，在研国家标准检测方法中引物的灵敏性更高，病毒的检测下限为10~0 IU/m L;Ni V假病毒均一性良好，可在4℃条件下稳定保存至少7 d，且能够抵抗一定量的RNase A降解。本试验成功包装含有Ni V N基因和L基因的假病毒，并对其进行初步应用和稳定性研究，为尼帕病毒性脑炎的防控提供物质储备。
关键词：尼帕病毒(NiV);;假病毒构建;;实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR);;敏感性试验
基金资助：2025年动物疫情监测与防治;; “十四五”国家重点研发计划项目（2022YFD1800500）;; 世界银行“预防、准备与应对新发传染病项目”农业农村部子项目（2205-000000-04-01-465744）
