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作者：王乃福;刘志玲;吴冬雪;孙雨;孙航;宋晓晖;张海滨;
单位：天津海关动植物与食品检测中心;广州海关技术中心;中国动物疫病预防控制中心;北京农学院;
摘要：本试验通过在重组杆状病毒表达系统中制备、纯化与鉴定蓝舌病病毒VP7抗原，为开发蓝舌病病毒免疫学抗体检测方法提供科学依据。利用SignalP与TMHMM在线软件分析VP7序列的信号肽与跨膜疏水区序列，对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化，将化学合成后的核苷酸序列连接至pFastBacHTA载体上，并构建相应的重组杆粒Bacmid-VP7-DH10Bac，转染sf9昆虫细胞后获得重组杆状病毒Bacmid-BTV-VP7株，利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达制备蓝舌病病毒VP7抗原。结果显示，重组杆粒Bacmid-VP7-DH10Bac转染sf9昆虫细胞并连续盲传5代后，成功获得重组杆状病毒Bacmid-BTV-VP7株，并成功表达纯化出VP7蛋白，大小约为43 kDa，蛋白纯度约为94%;VP7重组蛋白与其他疫病抗体无非特异性交叉。综上，重组VP7蛋白能够与BTV阳性血清呈现特异性反应，具有良好的反应原性，蛋白纯度高，并且具有病毒蛋白的生物学活性，将其作为诊断抗原，后期可用于开发系列免疫学抗体诊断检测技术。
关键词：蓝舌病;;重组VP7抗原;;杆状病毒;;真核表达;;蛋白鉴定
基金资助：国家重点研发计划（2022YFD1800500）;; 国家肉羊产业技术体系（CARS39）
