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作者：何缓缓;江舜祥;陶辉;曹炜;
单位：安徽医科大学第二附属医院胸外科;安徽医科大学第二附属医院麻醉与围手术期医学科;
摘要：目的 探讨磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)过表达对小鼠原代心脏成纤维细胞自噬的影响。方法 购入1～3 d小鼠乳鼠，行手术对心脏取材，消化后分离心脏成纤维细胞进行培养。细胞贴壁生长后使用雷帕霉素(Rapa)刺激构建心脏成纤维细胞自噬模型，模型构建成功后，向细胞转染PTEN过表达质粒(PTEN过表达组)和空载质粒(空载组),培养24～48 h。通过Western blot、RT-qPCR的方法在分子层面对PTEN、自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、苄青素1(Beclin1)和纤维化标志物胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)的表达进行检测；通过mCherry-GFP-LC3荧光染色测定自噬过程，检测心脏成纤维细胞自噬活性的变化。并通过透射电镜观察心脏成纤维细胞自噬体的变化。结果 在Rapa刺激构建的心脏成纤维细胞自噬模型中，相较于对照组，模型组的PTEN蛋白及mRNA水平下降(P<0.05),自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1和纤维化标志物CollagenⅠ蛋白及mRNA表达升高(P<0.05)。另外，过表达组心脏成纤维细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1和CollagenⅠ蛋白及mRNA的表达水平相较于空载组下降(P<0.05)。mCherry-GFP-LC3荧光染色实验表明，PTEN过表达组心脏成纤维细胞自噬活性较空载组明显下降(P<0.05)。透射电镜结果表明，PTEN过表达组心脏成纤维细胞自噬体较空载组减少(P<0.05)。结论 过表达PTEN能够抑制心脏成纤维细胞的自噬，提示PTEN可能是参与调控心脏成纤维细胞自噬的关键基因。
关键词：PTEN;;自噬;;LC3 Ⅱ/Ⅰ;;Beclin1;;心脏成纤维细胞;;心肌纤维化
基金资助：安徽省重点研究与开发项目(编号：202104j07020037)~~
