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作者：王伟康;左书俊;谷金涛;郭富媛;郭昊周;韩陈陈;魏伟;
单位：安徽医科大学药学科学学院临床药理研究所,抗炎免疫药物教育部重点实验室,抗炎免疫药物安徽省协同创新中心;
摘要：目的 应用CRISPR/Cas9技术构建肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)杂合子敲除小鼠，用于研究TNF-α-TRAF2信号转导异常介导的炎症免疫性疾病的病理机制及新靶点药物的开发。方法 构建靶向敲除TRAF2基因的载体，通过显微注射，将先导RNA和Cas9 mRNA导入到C57BL/6JGpt小鼠的受精卵中，介导小鼠TRAF2基因突变，提取鼠尾蛋白，通过PCR和Western blot测定F0代基因型，成功获得TRAF2~(+/-)小鼠。使用F0代小鼠与C57BL/6JGpt野生型小鼠回交，获得稳定的TRAF2~(+/-)小鼠用于扩繁及后续实验。检测TRAF2~(+/-)小鼠体质量；Western blot检测TRAF2~(+/-)小鼠脾脏、肝脏及肾脏组织中TRAF2表达；HE染色检测TRAF2~(+/-)小鼠脾脏、肝脏及肾脏组织的发育情况。结果 利用引物进行PCR鉴定，结果表明TRAF2~(+/-)小鼠在679 bp出现目的条带；Western blot结果表明，与野生型组比较，TRAF2~(+/-)小鼠鼠尾蛋白中TRAF2的表达明显下降(P<0.01)。与野生型小鼠比较，TRAF2~(+/-)小鼠体质量减轻(P<0.05);Western blot结果表明，与野生型小鼠比较，TRAF2~(+/-)小鼠的脾脏、肝脏及肾脏组织中TRAF2蛋白表达均降低(P<0.01)。HE染色结果表明，与野生型小鼠比较，TRAF2~(+/-)小鼠脾脏、肝脏及肾脏组织内细胞形态无明显差异。结论 成功构建TRAF2~(+/-)小鼠，为探究TRAF2在发育调控中的作用、揭示TNF-α-TRAF2信号异常介导的炎症免疫疾病机制以及筛选相关药物靶点提供了重要动物模型。
关键词：TRAF2;;CRISPR/Cas9;;基因敲除;;基因工程小鼠;;基因型鉴定;;表型研究
基金资助：国家自然科学基金(编号：82104187、82173824)~~
