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作者：倪蕾;孙晴晴;程姜瑞;魏伟;王春;
单位：安徽医科大学药学科学学院;
摘要：目的 二氯化钴(CoCl_2)体外诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)上皮-间充质转化(EMT)细胞模型的建立方法。方法 体外培养NRK-52E细胞，随机分为空白对照组(NC组)和CoCl_2处理组。CoCl_2处理组分别进行1、2、3、4个循环的处理，每个循环包括CoCl_2处理9 h后于无CoCl_2培养基中恢复3 h。采用CCK-8法筛选CoCl_2诱导EMT的最佳浓度和时间；通过光学显微镜和鬼笔环肽染色观察细胞形态学变化；采用Western blot和免疫荧光法检测EMT标志蛋白的表达水平。结果 与NC组相比，100μmol/L CoCl_2刺激48 h显著诱导细胞凋亡(P<0.01),符合后续实验要求。Western blot结果显示，100μmol/L CoCl_2处理NRK-52E细胞9 h后，于无CoCl_2培养基中恢复3 h,重复3个循环，缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达升高(P<0.001),表明细胞纤维化反应最为明显。通过光学显微镜和罗丹明标记的鬼笔环肽染色观察，100μmol/L CoCl_2处理NRK-52E细胞9 h后，于无CoCl_2培养基中恢复3 h,重复3个循环，NRK-52E细胞的形态学变化和细胞骨架重排最为显著，模型稳定性最佳。免疫荧光检测结果显示，与NC组相比，100μmol/LCoCl_2处理NRK-52E细胞9 h后，于无CoCl_2培养基中恢复3 h,重复3个循环，纤维基质蛋白Collagen I的荧光强度增加(P<0.001)。结论 100μmol/L CoCl_2处理NRK-52E细胞9 h后于无CoCl_2培养基中恢复3 h,重复3个循环，可成功建立体外EMT细胞模型。
关键词：NRK-52E细胞;;二氯化钴;;上皮-间充质转化;;缺氧诱导因子-1α;;α-平滑肌肌动蛋白
基金资助：安徽省重点研究与开发计划项目(编号：2023s07020003)~~
