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作者:王倩;杨芳;聂微;胡里花;张茂林;赵理想;金相任;严芝强;
单位:贵州医科大学研究生院;贵州医科大学附属医院临床检验中心;贵州医科大学附属医院胃肠外科;
摘要:目的 探讨核糖体蛋白L26(RPL26)在胃癌细胞(GC)中的表达及其对肿瘤细胞凋亡、增殖的影响。方法 Western blot检测胃黏膜上皮细胞GES-1和GC细胞株中RPL26的表达情况。选择GC细胞HGC-27构建过表达RPL26稳转细胞株,GC细胞HGC-27、AGS构建敲低RPL26稳转细胞株,并用Western blot检测RPL26过表达及敲低效率。细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和克隆形成实验及Transwell实验检测过表达和敲低RPL26后对GC细胞增殖、迁移能力的影响;Western blot检测过表达和敲低RPL26稳转细胞株中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路相关因子PI3K、AKT、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)及下游因子凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及细胞周期蛋白A(Cyclin A)、G_1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK2的表达。结果 与GES-1相比,RPL26在HGC-27中呈高表达(t_(HGC-27)=4.97;P<0.01),在AGS中表达升高,但差异无统计学意义。在HGC-27、AGS细胞中:CCK-8、克隆形成实验提示,敲低RPL26后细胞的增殖能力下降;Transwell实验提示敲低RPL26后细胞迁移能力减弱;Western blot实验显示,敲低RPL26后HGC-27、AGS细胞中Bcl-2表达下降(t_(HGC-27)=11.50,t_(AGS)=4.77;P<0.001,P<0.01),Bax表达升高(t_(HGC-27)=9.63,t_(AGS)=4.05;P<0.001,P<0.05);在HGC-27细胞中,敲低RPL26后p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的比值降低(t_(p-PI3K/PI3K)=3.86,t_(p-AKT/AKT)=8.29;P<0.05,P<0.01),细胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin D1、CDK4、CDK2表达均下降(t=9.61、5.10、11.64、7.81;P<0.01或P<0.001),而在HGC-27细胞中过表达RPL26则呈现相反趋势。结论 敲低RPL26可能通过抑制PI3K/AKT信号通路,使细胞周期阻滞于G_1/S期,从而抑制细胞增殖并促进凋亡。
关键词:胃癌;;核糖体蛋白L26;;PI3K/AKT信号通路;;细胞增殖;;细胞凋亡
基金资助:贵州省科技计划项目(编号:黔科合基础-ZK[2024]一般196);; 贵州省卫生健康委科学技术基金(编号:gzwkj2021-168);; 贵州医科大学博士科研启动基金(编号:gyfybsky-2021-31、gyfybsky-2021-66)~~