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作者：刘昊;阮晨;冯培培;李新伟;郭忠伟;楼柯浪;余小清;杜嘉;
单位：浙江省中医药研究院针灸研究所;浙江省立同德医院针灸科;浙江中医药大学第二临床医学院;浙江省立同德医院老年病科;
摘要：目的：观察针刺对脑出血（ICH）小鼠神经功能的影响，基于RNA测序和N6-甲基腺苷（m6A）甲基化测序技术，探讨针刺对ICH小鼠脑组织线粒体的作用机制。方法：将雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组，每组8只。采用自体血诱导ICH小鼠模型。针刺组于造模后给予针刺“百会”，每12 h干预1次，共7 d。干预结束后评估各组小鼠行为学评分；采用ELISA法检测小鼠脑组织丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）含量；采用基因测序技术分析针刺对ICH小鼠脑组织m6A修饰差异基因的影响；Western blot法检测线粒体外膜转位酶20(TOMM20)蛋白表达水平；PCR法检测脑组织Ndufb3、Ndufb6、Uqcr11、Cox7c、Ndufv1、Ndufb11及Cytb mRNA表达水平。结果：与假手术组比较，模型组小鼠平衡行走测试评分、悬线测试评分、脑组织GSH-Px及SOD含量降低（P<0.01），脑组织MDA含量升高（P<0.01）；与模型组比较，针刺组小鼠平衡行走测试评分、悬线测试评分及脑组织GSH-Px和SOD含量升高（P<0.01,P<0.05），脑组织MDA含量降低（P<0.01）。测序结果显示假手术组vs模型组、模型组vs针刺组的共有差异基因为342个，与线粒体相关基因有50个。GO、KEGG富集分析和蛋白互相作用分析结果显示差异基因主要富集在氧化磷酸化等通路。PCR及Western blot验证结果显示，与假手术组比较，模型组小鼠脑组织Ndufb3、Ndufb6、Uqcr11、Cox7c、Ndufv1、Ndufb11及Cytb mRNA表达水平降低（P<0.01）,TOMM20蛋白表达水平降低（P<0.01）；与模型组比较，针刺组Ndufb3、Ndufb6、Uqcr11、Cox7c、Ndufv1、Ndufb11及Cytb mRNA表达水平升高（P<0.01）,TOMM20蛋白表达水平升高（P<0.01）。结论：针刺可改善ICH小鼠神经功能缺损体征，其机制可能与调节小鼠脑组织线粒体功能有关。
关键词：针刺;;脑出血;;m6A甲基化;;线粒体;;氧化应激
基金资助：浙江省自然科学基金项目(No.LY24H270008);; 国家自然科学基金项目(No.82274648、81804168);; 国家中医药管理局科技司-浙江省中医药管理局共建重点实验室项目(No.GZY-ZJ-SY-2402)
