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作者：张枫帆;张小娜;张星华;年芳红;袁博;李芳;胡乐乐;李向军;王海东;杜小正;
单位：甘肃省中医院;中国中医科学院西苑医院济宁医院;甘肃中医药大学附属医院;甘肃中医药大学;
摘要：目的：观察热补针法对类风湿关节炎（RA）寒证家兔模型膝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)-K63泛素化水平及核因子-κB(NF-κB)通路的影响，探讨热补针法抑制RA滑膜炎性反应的机制。方法：32只家兔中随机抽取8只为正常组。剩余家兔采用卵蛋白联合完全弗氏佐剂诱导及低温冷冻法建立RA寒证模型，评估后随机分为模型组、抑制剂组、热补针法组，每组各6只。抑制剂组给予C25-140溶液（2.5 mg/kg）腹腔注射，2次/d，共14 d；热补针法组采用热补针法的操作标准针刺“足三里”，留针30 min,1次/d，共14 d。干预完成后测量家兔膝关节周径和痛阈值，彩色多普勒超声观察膝关节影像学变化，HE染色观察膝关节滑膜组织形态学变化，免疫组织化学法检测滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-1β、IL-6的表达，Western blot法检测滑膜组织中泛素结合酶E2 13(Ubc13)、NF-κB p65的蛋白表达，免疫共沉淀法检测滑膜组织中TRAF6-K63泛素化水平。结果：与正常组比较，模型组痛阈值降低（P<0.05），膝关节周径增加（P<0.05），滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6的平均吸光度值升高（P<0.05）,NF-κB p65蛋白表达、TRAF6蛋白K63泛素化水平升高（P<0.05）,Ubc13蛋白表达降低（P<0.05），多普勒超声见膝关节滑膜广泛性增生、肥厚，关节积液明显，HE染色示滑膜细胞肿胀变大明显，形态破坏，广泛的炎性细胞及淋巴细胞的浸润；与模型组比较，热补针法组及抑制剂组的痛阈值升高（P<0.05），膝关节周径减小（P<0.05），滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6的平均吸光度值降低（P<0.05）,NF-κB p65蛋白表达、TRAF6蛋白K63泛素化水平明显降低（P<0.05）,Ubc13蛋白表达升高（P<0.05），多普勒超声见滑膜增生、肥厚程度有所改善，血流信号减少，关节积液明显减少，HE染色示滑膜细胞增生、肿大及炎性浸润较模型组均有所改善；与热补针法组比较，抑制剂组家兔痛阈值降低（P<0.05），膝关节滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-6的平均吸光度值降低（P<0.05）,NF-κB p65蛋白表达、TRAF6蛋白K63泛素化水平降低（P<0.05）,Ubc13蛋白表达升高（P<0.05）。结论：热补针法可通过抑制TRAF6-K63泛素化水平，下调NF-κB通路活性，减少下游炎性因子的分泌，从而起到抑制滑膜炎性反应的作用。
关键词：热补针法;;类风湿关节炎;;TRAF6泛素化;;炎性反应;;核因子-κB通路
基金资助：国家自然科学基金委员会地区科学基金项目(No.82060891);; 甘肃省青年科技基金项目(No.23JRRA1686)
