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作者：方秀峰;崔冰佳;徐金玲;王勇;
单位：深圳大学生命与海洋科学学院,深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室,深圳市脑病和大数据研究所;深港脑科学创新研究院;深圳湾实验室;
摘要：纳升液相色谱-高分辨串联质谱技术被广泛应用于体液多肽组分析，但平行分析次数对分析结果的影响尚未被充分研究。本研究以唾液多肽组为例，对同一样本进行10次平行分析，结果显示，10次分析的质荷比与分子量范围基本一致，单次分析鉴定到的特异性肽段数为348～576个，对应32～39种降解蛋白质，而合并10次结果后共鉴定出1237条肽段（归属77种降解蛋白质），即多肽数量为单次测定的2.5倍，降解蛋白质数量增加1倍，表明单次分析无法全面反映唾液多肽组组成。仪器稳定性验证结果显示，12条随机选取肽段的信号强度与保留时间波动较小。进一步分析发现，合并后新增肽段主要富集于Statherin和Salivary acidic proline-rich phosphoprotein 1/2等高丰度蛋白。以22条肽段为例，实验发现，有些肽段在不同分析轮次中都能被检出，但置信度在19%～99%范围内波动；有些单次置信度小于95%的肽段在重复分析后，置信度超过95%；信号强度并非影响置信度的唯一因素；多肽组中归属于同一个降解蛋白质的最长和最短肽段之间的其它序列相关肽段都可能被检出。本研究结果表明，基于液相色谱-质谱的单次多肽组分析结果存在假阴性和不确性，结合内源多肽的酶解机制可对高丰度降解蛋白质的肽段进行预测和拓展。
关键词：多肽组;;唾液;;假阴性;;重复次数;;高分辨串联质谱
基金资助：深港脑科学创新研究院项目（No.2023SHIBS0003）资助~~
