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作者：侯佩;张君旗;蒋彪;李猛;赵晨颖;
单位：郑州轻工业大学烟草科学与工程学院;河南八方健康食品研究院有限公司;
摘要：叶绿素酶催化叶绿素降解的第一步，在叶片衰老、开花和果实成熟过程中起关键作用。为明确花烟草(Nicotiana alata)叶绿素酶2(chlorophyllase2,简称CLH2)基因的功能，本研究利用同源克隆的方法从花烟草中克隆CLH2基因，进行生物信息学分析，并采用实时荧光定量PCR技术对其组织特异性表达及非生物胁迫和不同激素处理花烟草幼苗后的表达特性进行分析。结果表明，从花烟草中克隆到开放阅读框全长为960 bp的NalaCLH2基因序列(GenBank登录号为PP445034),编码319个氨基酸；预测NalaCLH2蛋白分子量为34.59 kDa,理论等电点为6.75,为稳定非跨膜非分泌蛋白，主要定位于叶绿体；NalaCLH2为含有chlorophyllase2保守结构域、不含信号肽的亲水蛋白。组织特异性表达分析发现，NalaCLH2基因在花烟草的根(主根和侧根)、茎(上茎、中茎和下茎)、叶(上部和下部叶)和花(花萼和花瓣)中均有表达，但其表达量在花萼中最高、在花瓣中最低。NalaCLH2基因受低温、脱落酸、赤霉素和茉莉酸甲酯的诱导上调表达，而NaCl、干旱及油菜素内酯则抑制该基因的表达。本研究结果可为进一步解析NalaCLH2基因在花烟草非生物胁迫和激素信号转导途径中的功能提供参考依据。
关键词：花烟草;;叶绿素酶2;;基因克隆;;表达模式分析
基金资助：郑州轻工业大学博士科研基金项目(2015BSJJ020);; 河南省科技特派员项目(SPY20180015)
