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作者：傅璟玥;马勇;周勤峰;孙杰;潘娅岚;王礼宁;李沐哲;黄项阳;郭杨;
单位：南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室;南京中医药大学附属盐城中医院;南京中医药大学中西医结合学院;
摘要：目的 从骨-软骨代谢及低氧诱导因子（HIFs）/骨保护素（OPG）/核因子κB受体激活因子配体（RANKL）通路探讨温肾通络止痛方治疗骨质疏松症和骨关节炎共病的可能作用机制。方法 35只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阿仑膦酸钠组、温肾通络止痛方低剂量组及高剂量组，每组7只。除假手术组外，其余各组大鼠采用双侧卵巢去除术+改良式Hulth术构建骨质疏松症和骨关节炎共病大鼠模型。于造模结束后2周开始干预，温肾通络止痛方低剂量组、高剂量组分别给予温肾通络止痛方14.76、29.52 g/（kg·d）灌胃，每日1次；阿仑膦酸钠组给予6.3 mg/kg灌胃，每周1次；假手术组与模型组均以10 ml/（kg·d）生理盐水灌胃，每日1次。干预10周后，观察大鼠膝关节大体形态并进行Collins评分；采用Micro-CT检测股骨远端骨密度和胫骨平台软骨下骨骨微结构[包括骨体积分数（BV/TV）、骨小梁分离度（Tb. Sp）];HE染色和番红固绿染色观察膝关节病理变化，并进行Mankin评分；采用ELISA法测定血清炎症因子水平[包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)]和HIFs/OPG/RANKL信号通路相关因子[包括缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子2α(HIF-2α)、OPG、RANKL]水平，并计算OPG/RANKL比值；免疫荧光检测膝关节HIF-1α、HIF-2α蛋白表达；Western Blot法测定膝关节骨-软骨代谢[包括Ⅱ型胶原α1链（COL2A1）、Ⅰ型胶原α2链（COL1A2）、基质金属蛋白酶13(MMP13)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、Runt相关转录因子（RUNX2）]和HIFs/OPG/RANKL蛋白[包括OPG、RANKL、HIF-1α、HIF-2α、Egl九同源蛋白（EGLN）]水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠膝关节Collins评分、Mankin评分显著升高；骨密度、BV/TV显著下降，Tb. Sp显著上升；血清TNF-α、IL-1β、RANKL、HIF-1α、HIF-2α水平升高，OPG/RANKL水平降低；HIF-1α蛋白平均免疫荧光强度降低，HIF-2α蛋白平均免疫荧光强度升高；膝关节COL2A1、COL1A2、HIF-1α、OPG/RANKL水平降低，MMP9、MMP13、RUNX2、RANKL、HIF-2α、EGLN蛋白水平升高（P<0.05）。与模型组比较，温肾通络止痛方高剂量组和阿仑膦酸钠组上述各指标均改善（P<0.05）。温肾通络止痛方高剂量组在改善血清HIF-1α、HIF-2α、OPG水平，HIF-2α蛋白平均免疫荧光强度，COL2A1、MMP9、RUNX2、COL1A2、OPG、OPG/RANKL、EGLN水平方面优于温肾通络止痛方低剂量组（P<0.05）；阿仑膦酸钠组在降低血清TNF-α、IL-1β、HIF-1α、HIF-2α水平和膝关节HIF-1α、HIF-2α蛋白平均荧光强度方面优于温肾通络止痛方低剂量组（P<0.05）。结论 温肾通络止痛方可能通过调控膝关节HIFs/OPG/RANKL通路，平衡骨代谢和改善软骨退变，进而缓解骨质疏松和骨关节炎共病发展进程。
关键词：骨质疏松症;;骨关节炎;;低氧诱导因子;;骨保护素;;核因子κB受体激活因子配体;;骨代谢;;温肾通络止痛方
基金资助：国家自然科学基金（82174411）;; 江苏省自然科学基金（BK20221351）;; 国家中医药管理局高水平中医药重点学科建设项目（国中医药人教函[2023]85号）;; 盐城市基础研究计划（YCBK2024087）;; 江苏省研究生科研创新计划（KYCX24＿2190）
