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作者：张杰;王家慧;刘韩彬;刘如歌;卫佳豪;柳雪影;杨俊红;高峰;
单位：河南中医药大学第一附属医院;河南中医药大学第一临床医学院;郑州大学河南医药科学研究院;
摘要：目的 从辅助性T细胞（Th）/调节性T细胞（Treg）免疫轴角度探讨健脾补肾益气方治疗重症肌无力的可能作用机制。方法 将104只雌性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组（12只）与模型组（92只）。模型组小鼠皮下注射鼠源性乙酰胆碱受体（AChR）-α亚基97-116肽段、磷酸缓冲液（PBS）、弗氏完全佐剂（CFA）混合而成的免疫乳剂制备实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）小鼠模型。将造模成功的65只小鼠随机分为模型对照组，健脾补肾益气方低、中、高剂量组，强的松组，每组13只。健脾补肾益气方低、中、高剂量组给药剂量分别为7.46、14.92、29.84 g·kg~(-1)·d~(-1)，强的松组给予强的松片9.10 mg·kg~(-1)·d~(-1)，空白对照组和模型对照组给予0.9%氯化钠溶液0.30 ml。各组每日灌胃1次，连续灌胃5周。干预前后记录各组小鼠体质量及Lennon评分，采用拉力计测定小鼠抓握力。干预后计算小鼠脾脏和胸腺指数，HE染色观察胸腺、淋巴结组织形态，流式细胞术检测脾脏细胞混悬液中辅助性T细胞1(Th1)、辅助性T细胞2(Th2)、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞（Treg）、滤泡辅助性T细胞（Tfh）百分比，免疫荧光法检测小鼠肌群神经肌肉接头（NMJ）上的AChR形态，ELISA法检测血清乙酰胆碱受体抗体（AChR-Ab）、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果 与模型对照组比较，强的松组小鼠体质量、Lennon评分、胸腺指数、脾脏指数、淋巴结生发中心个数、Treg百分比、血清AChR-Ab及TNF-α均降低，抓握力、胸腺皮质髓质面积比、眼肌AChR面积比及IL-6水平均升高（P<0.05或P<0.01）；健脾补肾益气方各剂量组淋巴结生发中心个数及Th17、Tfh百分比均降低，抓握力及多肌群的AChR面积比升高，中、高剂量组Th1百分比及AChR-Ab、TNF-α水平降低，高剂量组Lennon评分、IL-6水平降低，胸腺皮质髓质面积比、Treg百分比升高（P<0.05或P<0.01）。与强的松组比较，健脾补肾益气方各剂量组体质量、胸腺指数均升高，Th2、Th17、Tfh百分比及IL-6均降低（P<0.05或P<0.01）；低、中剂量组Lennon评分、淋巴结生发中心个数升高，中、高剂量组Treg百分比升高而Th1百分比降低，各剂量组对不同肌群AChR面积比有升高作用（P<0.05或P<0.01）。结论 健脾补肾益气方可通过调控Th/Treg免疫轴重塑免疫微环境，增加肌群AChR表达，从而改善EAMG小鼠肌无力症状。
关键词：重症肌无力;;健脾补肾益气方;;辅助性T细胞;;调节性T细胞;;乙酰胆碱受体;;免疫微环境
基金资助：国家重大疑难疾病中西医临床协作项目（ZDYN-2024-A-157）;; 河南省重点研发与推广专项（232102311196）;; 河南中医药大学“双一流”创建工程中医学学科项目（HSRP-DFCTCM-2023-1-27）;; 河南省卫生健康委员会国家中医药传承创新中心联合共建科研专项（2024ZXZX1033）
