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作者：黄渤皓;武庆娟;汪九重;李彦波;雷超;吕文良;
单位：中国中医科学院广安门医院;北京中医药大学研究生院;
摘要：目的 基于机械敏感性离子通道蛋白1(Piezo1)/磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)通路探讨茵芪三黄解毒汤改善肝纤维化的作用机制。方法 将50只C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为对照组、模型组和茵芪三黄解毒汤低、中、高剂量组，每组10只。除对照组外，其余各组小鼠通过腹腔注射10%CCl_4（每周2次，持续6周）复制肝纤维化小鼠模型。造模结束当天，茵芪三黄解毒汤低、中、高剂量组分别予茵芪三黄解毒汤混悬液3.79、7.58、15.16 ml/（kg·d）灌胃，对照组和模型组予等量生理盐水灌胃，每日1次，持续8周。给药结束次日，采用超声成像检测肝脏硬度值，原子力显微镜检测肝组织杨氏模量，HE染色检测肝脏组织病理形态，天狼猩红染色检测肝脏组织胶原沉积情况，全自动生化分析仪检测血清肝功能[丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）]和肝纤维化四项[层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）及Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）]水平，流式细胞术检测肝脏组织M1/M2比值，实时荧光定量PCR法检测肝脏组织转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagen-Ⅰ）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg-1)、甘露糖受体（CD206） mRNA表达，Western Blot法检测Piezo1、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)及AKT蛋白水平。结果 与对照组比较，模型组小鼠肝脏硬度值、杨氏模量升高（P<0.01）；肝脏结构紊乱，胶原纤维沉积比例升高（P<0.01）；血清ALT、AST、TBIL、DBIL、HA、PC-Ⅲ水平及M1/M2比值升高，TGF-β1、α-SMA、collagen-Ⅰ、iNOS、TNF-αmRNA表达升高，Arg-1、CD206 mRNA表达降低，肝脏组织Piezo1、p-PI3K、p-AKT蛋白水平升高（P<0.01）。与模型组比较，茵芪三黄解毒汤各剂量组上述各指标均显著改善（P<0.01）。茵芪三黄解毒汤高剂量组在改善肝脏硬度值、肝脏杨氏模量、胶原纤维沉积比例、ALT、DBIL、HA、PC-Ⅲ、M1/M2比值，TGF-β1、α-SMA、collagen-Ⅰ、TNF-α、Arg1、CD206 mRNA表达，Piezo1、p-PI3K、PI3K蛋白水平方面，均优于茵芪三黄解毒汤低剂量组（P<0.01）。结论 茵芪三黄解毒汤可能通过抑制Piezo1/PI3K/AKT信号通路，促进巨噬细胞由促炎的M1型向抗炎的M2型极化，发挥抗肝纤维化的作用。
关键词：肝纤维化;;巨噬细胞极化;;机械转导;;肝脏硬度;;茵芪三黄解毒汤
基金资助：国家自然科学基金（82374332）;; 中央高水平中医医院临床研究和成果转化能力提升项目（HLCMHPP2023086）;; 国家中医药传承创新团队项目（ZYYCXTD-C-202405）
