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作者：王永福;柯威;谢翔雨;唐洪梅;司刘哲;柴玉娜;
单位：郑州大学第一附属医院;佛山市中医院;广州中医药大学第一临床医学院;广州中医药大学第一附属医院;
摘要：目的 从微小RNA-29b-3p(miR-29b-3p)/肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)/核因子κB(NF-κB)/肌球蛋白轻链激酶（MLCK）轴探究肠激安方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征（IBS-D）肠道通透性影响的可能机制。方法 取出生1天的雄性SD窝鼠24只，采用三因素法（母婴分离+醋酸刺激+束缚应激）共6周制备肝郁脾虚型IBS-D大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、匹维溴铵组和肠激安方低、高剂量组，每组6只，另取6只同龄未造模SD大鼠作为对照组。肠激安方低、高剂量组分别给予肠激安方溶液16.74、33.48 g/（kg·d）灌胃，匹维溴铵组大鼠给予匹维溴铵片0.018 g/（kg·d）灌胃，对照组同时予10 ml/（kg·d）蒸馏水灌胃。每日1次，连续14天。灌胃结束后，检测各组大鼠粪便含水量，采用ELISA法检测大鼠血清肠道通透性指标D-乳酸（D-LA）、二胺氧化酶（DAO）和脂多糖（LPS）含量，实时荧光定量PCR法检测大鼠结肠组织miR-29b-3p、TRAF3、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、p65、p50、MLCK mRNA表达，Western Blot法检测结肠组织TRAF3、TNF-α、p65、磷酸化p65(p-p65)、MLCK、肌球蛋白轻链（MLC）、磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）及紧密连接蛋白[连接黏附因子A(JAM-A)、闭锁蛋白（Occludin）、紧密连接蛋白1(Claudin-1)]蛋白水平。结果 与对照组比较，模型组大鼠粪便含水量和血清D-LA、DAO、LPS含量均升高，结肠组织JAM-A、Occludin、Claudin-1蛋白水平降低（P<0.05或P<0.01），结肠组织miR-29b-3p、TNF-α、p65、p50、MLCK mRNA表达升高，TRAF3 mRNA及蛋白表达降低，TNF-α、MLCK蛋白水平及p-p65/p65、p-MLC/MLC比值升高（P<0.01）。与模型组比较，各给药组大鼠粪便含水量及血清D-LA、DAO、LPS含量降低，结肠组织miR-29b-3p、TNF-α、p65、p50、MLCK mRNA表达降低，TRAF3 mRNA表达升高；匹维溴铵组、肠激安方高剂量组大鼠结肠组织Occludin、Claudin-1、TRAF3蛋白水平升高，TNF-α、MLCK蛋白水平及p-p65/p65、p-MLC/MLC比值降低（P<0.05或P<0.01）。与肠激安方低剂量组比较，肠激安方高剂量组粪便含水量和血清DAO、LPS含量降低（P<0.01）。与匹维溴铵组比较，肠激安方高剂量组大鼠血清DAO含量降低（P<0.01）。结论 肠激安方可能通过调控miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK轴，从而降低肝郁脾虚型IBS-D模型大鼠肠道通透性，恢复肠道屏障功能。
关键词：腹泻型肠易激综合征;;肝郁脾虚型;;肠道通透性;;微小RNA-29b-3p;;肿瘤坏死因子受体相关因子3;;核因子κB;;肌球蛋白轻链激酶;;肠激安方
基金资助：河南省自然科学基金（242300420397,242300421271）;; 河南省医学科技攻关计划项目（LHGJ20230254）
