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作者：金环;卢俊杰;黄财;何紫移;沈霖;马陈;汪子贤;帅波;
单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科;武汉体育学院运动医学院;襄阳市中心医院中心实验室;
摘要：目的 探讨加味青娥丸（modified Qing,E formula, MQEF ）对绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis, PMOP）患者血清外泌体中miRNA表达谱的影响并明确呈显著倒“V”型变化趋势的miRNA。方法 按照入排标准严格纳入6名健康绝经后女性作为健康对照组，纳入12例PMOP患者（治疗前标记为PMOP组），予MQEF治疗3个月（治疗后标记为MQEF组）。分别抽取3组人群血清样本，并获取血清外泌体miRNA，使用DNBSEQ测序平台对数据进行过滤及质控，对得到的miRNA进行差异性分析及表达差异排序，使用qRT-PCR验证测序结果。进行生物信息学分析，以识别MQEF的主要作用靶点及相关作用通路。结果 从3组样本中共提取1 130个miRNA，健康对照组与PMOP组血清外泌体存在54个显著差异性表达的miRNA(1个下调，53个上调)，差异表达排名前五的miRNA为hsa-miR235-3p、 hsa-miR26-5p、hsa-miR239-5p、 hsa-miR121-5p、 hsa-miR148-3p。PMOP组和MQEF组存在11个显著差异性表达的miRNA(10个下调，1个上调)，差异表达排名前五的miRNA分别为hsa-miR177-3p、 hsa-miR148-3p、 hsa-miR294-3p、hsa-miR162-3p、 hsa-miR260-5p。其中hsa-miR148-3p不仅在3组样本中显著差异表达，且其表达量呈倒“V”型变化趋势，qPCR验证结果显示hsa-miR148-3p在PMOP组上调7.7倍，在MQEF组下调9.9倍，差异有统计学意义（P<0.05）。获得hsa-miR148-3p与PMOP预测靶基因交集212个，PPI蛋白网络互作分析表明其作用的潜在靶点可能为STAT3、 SRC、 TGFB1。对MQEF治疗前后的显著差异表达miRNA进行富集分析。GO富集分析表明MQEF治疗PMOP与酶催化、氧化应激等关键环节有关，KEGG富集分析发现MQEF治疗PMOP与mTOR信号通路密切相关。结论 MQEF治疗PMOP可能与mTOR信号通路及氧化应激等相关。MQEF能够显著下调PMOP患者血清外泌体中的miR148-3p水平，并可能通过潜在作用靶点STAT3、 SRC、 TGFB1发挥作用。
关键词：绝经后骨质疏松症;;加味青娥丸;;转录组测序;;微RNA
基金资助：国家自然科学基金（82174182、 81974546、 82004201）;; 中央高校基本科研业务费专项资金资助（2019kfyRCPY093）
