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作者：房琳琳;张锋;刘爽;魏荣;董雅琴;包静月;
单位：中国动物卫生与流行病学中心;
摘要：为提高猪流行性腹泻病毒（PEDV）核酸检测结果的准确性，本试验建立PEDV微滴式数字聚合酶链式反应（ddPCR）检测方法；制备PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质，通过实时荧光定量PCR(qPCR)和PCR方法检测外源病原体以评价其纯净性；采用ddPCR方法检测PEDV N基因的绝对定量值以评估该标准物质的均匀性、稳定性并与9家实验室合作定值；进一步采用qPCR方法对该标准物质进行应用评估。结果显示，本试验建立并优化了PEDV ddPCR方法，制备的PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质不存在外源病原体感染；组内和组间无显著性差异（P > 0.05），均匀性好；该标准物质于-20℃稳定保存9个月，4℃稳定保存7 d,25℃稳定保存24 h，可反复冻融3次；该标准物质定值结果为（1.64±0.262 4）×10~3 copies/μL；应用评估证实，该标准物质在qPCR检测体系中表现可靠，适用性良好，可以用于qPCR检测。结果表明，本试验研制的PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质具备准确的定值和良好的稳定性，可直接应用于检测试剂盒开发、实验室方法验证与质量控制全过程，是实现PEDV核酸检测标准化的关键物质基础。
关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV);;N基因;;微滴式数字PCR(ddPCR);;标准物质;;定值
