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作者：崔平;刘澜;李本科;白耀国;李玉坤;管宇;
单位：滨州市农业技术推广中心;山东华宏生物工程有限公司;滨州市沾化区畜牧兽医管理服务中心;山东省滨州畜牧兽医研究院;
摘要：为了开展E种牛肠道病毒（BEV-E）的流行病学调查和抗体筛查，本试验采用原核表达技术对BEV-E外衣壳蛋白VP1进行体外截短表达，采用His-Tag蛋白纯化柱对VP1重组蛋白进行纯化，采用蛋白免疫印迹（WB）方法对重组蛋白进行鉴定。以纯化的VP1重组蛋白作为包被抗原，对反应条件进行优化和确定临界值，建立了检测BEV-E抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法，并进行特异性、灵敏性、重复性、符合率试验和临床样品检测。结果显示，成功表达VP1重组蛋白；间接ELISA检测方法的最佳抗原工作浓度为15.0??g/mL，最佳一抗稀释倍数为1∶80，最佳酶标二抗稀释倍数为1∶3 000，最佳封闭液为10%马血清，最佳一抗、酶标二抗、封闭液工作时间分别为30、30、60 min；临界值为0.386；与牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛冠状病毒、牛轮状病毒、O型口蹄疫病毒、A型口蹄疫病毒、产肠毒素性大肠杆菌阳性血清均无交叉反应，特异性良好；BEV-E阳性血清1∶25 600稀释时仍可检测出阳性，灵敏性较高；批内和批间变异系数均小于10%，重复性良好；该方法与间接免疫荧光检测方法的符合率为92.5%；临床样品检测结果显示，BEV-E抗体平均阳性率为7.88%。结果表明，本试验建立的BEV-E VP1抗体间接ELISA检测方法为开展BEV-E临床诊断和流行病学调查提供了试验依据。
关键词：E种牛肠道病毒(BEV-E);;VP1蛋白;;截短表达;;抗体检测;;间接ELISA
基金资助：山东省牛产业技术体系滨州综合试验站（SDAIT-09-12）
