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作者:韩俊伟;刘智华;黄小东;张启顺;苏玉贤;
单位:新乡市农业综合行政执法支队;南阳市宛城区畜牧发展中心;河南农业大学动物医学院;平顶山市畜牧业发展中心;
摘要:为了查明河南省南阳市宛城区某羊场病死山羊的致病菌及其病原特性,本试验采集病死山羊肝脏、肺脏等病料,分离培养细菌,通过16S rDNA基因测序和遗传进化分析鉴定分离菌株的种属,通过PCR检测毒素基因确定其分型,对分离菌株进行多位点序列分型(MLST)、全基因组测序和遗传进化分析、单核苷酸多态性(SNP)分析,根据毒力因子数据库(VFDB)和综合抗生素耐药基因数据库(CARD)预测分离菌株的毒力基因和耐药基因;运用K-B琼脂纸片法检测分离菌株对12种抗菌药物的敏感性,并通过小鼠感染试验分析其致病性。结果显示,分离鉴定得到1株A型产气荚膜梭菌(命名为WC202409)。全基因组遗传进化分析结果显示,该菌株与俄罗斯源产气荚膜梭菌(C. perfringens)QDAF01亲缘关系较近。SNP分析结果显示,分离菌株与我国菌株1718G、QHY-2、XZ-D1、ZWCP079的SNP差异数很小。VFDB注释到11种毒力因子和16种与产气荚膜梭菌相关的基因;CARD注释到6类抗生素14种耐药基因。药敏试验结果显示,分离菌株WC202409对四环素、头孢唑林、苯唑西林、青霉素G、链霉素和氟苯尼考耐药,对头孢噻肟、恩诺沙星、头孢曲松和亚胺培南敏感。小鼠致病性试验结果显示,试验组小鼠感染分离菌株5 d后全部死亡,剖检可观察到明显病变,经验证,致病菌为WC202409。结果表明,WC202409分离菌株为该羊群致病菌,对多种药物耐药,致病力强,可能来源于常年跨境贩运传播。本试验结果有助于产气荚膜梭菌病防控以及病原体和商业疫苗研究。
关键词:山羊;;产气荚膜梭菌;;分离鉴定;;多位点序列分型(MLST);;耐药性
基金资助:河南农业大学实践教学基地项目(2023SJJD05);; 河南省肉羊产业技术体系项目(HARS-22-15-G1)