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作者：谢建华;蒋佳利;骆璐;张超;苗清新;凌洪权;陈忠琼;蔺露;丁平;黄诚;刘玉良;曾政;
单位：重庆市动物疫病预防控制中心;中国动物疫病预防控制中心;
摘要：为了给狂犬病实验室核酸检测提供标准化质控品，提升检测结果的准确性，本试验将狂犬病病毒（RABV）核蛋白（N）基因序列克隆至慢病毒表达载体pGWLV-pseudovirus，构建重组真核表达质粒，与慢病毒辅助质粒共转染至人胚肾293T细胞，制备RABV N基因假病毒；对RABV N基因假病毒进行灭活验证、PCR验证和质粒残留检测，以及特异性和稳定性评估。结果显示，本试验构建的重组真核表达质粒大小为8 961 bp，与预期大小相符；镜检可见假病毒已成功制备，病毒颗粒在灭活前后形态结构均完整。灭活后假病毒检测结果显示，其中慢病毒滴度为0 TU/mL，安全性高；呈RABV核酸阳性且无质粒残留；不与犬副流感病毒、犬腺病毒2型、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬冠状病毒、犬疱疹病毒和支原体发生交叉反应，特异性高；可在-20℃环境条件下稳定保存36个月，稳定性强。结果表明，本试验获得了稳定性强、质量合格的RABV N基因假病毒，可用于狂犬病实验室核酸检测全过程的质控。
关键词：狂犬病病毒(RABV);;假病毒;;N基因;;构建
基金资助：国家标准样品研复制项目（S2021064）
