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作者：肖涛;肖淑婷;何军;代宛丘;王浩;石佳佳;邬向东;刘平;陈小庆;
单位：江西农业大学动物科学技术学院江西省动物疫病诊断与防控重点实验室;
摘要：为了给鸽源禽毛滴虫病的早期诊断提供高效、准确的技术手段，本试验将套式聚合酶链式反应（PCR）技术应用于鸽源禽毛滴虫的检测，基于其18S rRNA基因序列设计特异性引物A1/S1和F2/R2，构建重组阳性质粒，优化反应条件以建立鸽源禽毛滴虫套式PCR方法，验证该方法的特异性和灵敏性，通过鸽毛滴虫复壮、人工感染检测和临床样品检测系统验证该方法的可靠性。结果显示，重组阳性质粒构建成功，并经测序验证其为鸽源禽毛滴虫的特异性序列。内、外引物的最适引物浓度均为0.08μmol/L，最适退火温度分别为58和56℃。该套式PCR方法与大肠杆菌、沙门菌、白色念珠菌、艾美耳球虫和刚地弓形虫等常见病原体无交叉反应，特异性较强，且具有极高的灵敏性，最低可检测至0.25 copies/μL。在人工感染检测中，套式PCR方法可检测时间限远优于体外培养法和传统镜检法。临床样品检测中，PCR检测阳性率为73.21%(41/56)，而套式PCR阳性率为96.43%(54/56)。结果表明，本试验建立的套式PCR方法特异性强、灵敏性高，具有较强的实际应用价值。
关键词：禽毛滴虫;;套式PCR;;肉鸽;;人工感染
基金资助：国家自然科学基金（32202839）;; 吉安市科技计划项目科技专项（20222-191730）;; 遂川县县本级科技创新计划项目
