来源：期刊VIP网 时间：
作者：刘晓娜;段春辉;郑庆丰;王会杰;左艳华;李祥龙;刘月琴;张英杰;
单位：河北农业大学动物科技学院;秦皇岛市畜牧工作站;青龙满族自治县农业农村局;河北科技师范学院动物科技学院;
摘要：附睾是精子成熟和贮存的场所,附睾上皮细胞分泌附睾液,促进精子发育成熟。附睾上皮细胞的增殖分化受生殖激素调控,而催乳素(PRL)是否参与了该过程还有待研究。本试验通过对绒山羊附睾上皮细胞的体外培养,研究PRL对附睾上皮细胞增殖、迁移和凋亡的影响。无菌采集燕山绒山羊附睾组织,利用酶消化法分离附睾上皮细胞,差速贴壁法和二次胰酶消化法纯化细胞,免疫荧光法鉴定细胞。将纯化后的附睾上皮细胞随机分为7组,每组6个重复,分别在培养液中添加0(对照组)、25、50、75、100、200和400 ng/mL PRL,在培养12 h、24 h和48 h时,采用CCK-8法检测细胞的增殖活性。筛选出PRL促进附睾上皮细胞增殖的最佳浓度和时间后,分别利用细胞划痕实验,流式细胞术和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞迁移、凋亡及凋亡基因的表达水平。结果表明:培养12 h时,添加25、50、75和100 ng/mL PRL组附睾上皮细胞的增殖活性显著高于对照组(P<0.05),且添加量为50 ng/mL PRL组的细胞增殖活性最高,200和400 ng/mL PRL组细胞的增殖活性与对照组差异不显著(P>0.05);培养24 h和48 h后,添加25、50和75 ng/mL PRL组的细胞增殖活性与对照组差异不显著(P>0.05),而100、200和400 ng/mL PRL组的细胞增殖活性显著低于对照组(P<0.05)。细胞划痕实验结果表明,培养12 h时50 ng/mL PRL组的细胞迁移距离和迁移率显著高于对照组(P<0.05),细胞总凋亡率和凋亡基因Bax、Caspase-3的表达水平均显著低于对照组(P<0.05),抗凋亡基因Bcl-2的表达水平显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,添加适宜浓度的PRL(50 ng/mL),并处理细胞12 h,可显著促进附睾上皮细胞的增殖和迁移并抑制其凋亡。
关键词：绒山羊;;催乳素;;附睾上皮细胞;;增殖;;凋亡
基金资助：农业生物育种重大专项(2023ZD0405102);; 国家绒毛用羊产业技术体系(CARS-39);; 中央引导地方科技发展资金项目(246Z6602G)
