来源：期刊VIP网 时间：
作者：陈晓良;冯海鹏;王磊;张景艳;赵雪剑;杨勤新;冯晓微;张康;李建喜;
单位：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所;甘肃省中兽医技术创新中心;农业农村部新兽药创制重点实验室;
摘要：本研究旨在探究隐丹参酮姜黄素复方对牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）诱导的牛卵巢颗粒细胞（Bovine ovarian granulosa cells,BOGCs）损伤的抑制作用。采集健康性成熟奶牛的卵巢，用抽吸法分离BOGCs。采用Reed-Muench法测定BVDV在BOGCs上的TCID_(50)。选择100 TCID_(50)BVDV感染BOGCs，用一步探针法分别检测感染0、6、12、24、48、72、96 h时BOGCs中BVDV的核酸载量，确定药物干预时间；利用CCK-8法评估隐丹参酮、姜黄素在BOGCs上的安全浓度，结合正交试验确定二者的最佳抗BVDV配比。设置空白组、BVDV组和药物治疗组，通过RT-qPCR和ELISA检测炎症因子HMGB1、IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的相对表达量及其蛋白水平；使用流式细胞术和RT-qPCR评估细胞凋亡水平；采用ELISA测定雌二醇（Estradiol,E_2）和孕酮（Progesterone,P_4）含量。结果表明，分离的BOGCs在培养3～5 d后贴壁，符合卵巢颗粒细胞特征，对数生长期为24～72 h;BVDV在BOGCs的TCID_(50)为10~(-4.84)/0.1 mL，感染24 h的拷贝数达到最高，lgx为4.96；隐丹参酮和姜黄素以10∶5配比时，抗病毒效果最佳。与空白组相比，BVDV感染极显著上调了BOGCs中HMGB1、IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的相对表达量及其蛋白水平（P<0.001），隐丹参酮姜黄素复方可显著降低炎性因子水平，同时极显著逆转BVDV诱导的BOGCs凋亡（P<0.001）。与空白组相比，BVDV导致细胞排卵基因COX-2和TSG6 mRNA的相对表达量及其蛋白水平极显著上升（P<0.001），激素E_2和P_4含量极显著降低（P<0.001），而隐丹参酮姜黄素复方能够抑制这些指标的异常变化。综上，隐丹参酮和姜黄素组成的复方可有效缓解BVDV诱导的BOGCs炎症、细胞凋亡及类固醇激素分泌紊乱，提示二者形成的合剂是抗BVDV感染的潜在药物，有进一步研发价值。
关键词：BVDV;;奶牛卵巢颗粒细胞;;隐丹参酮;;姜黄素;;炎症
基金资助：国家自然科学基金(32172903);; 国家现代农业产业技术体系(CARS-36-04);; 国家重点研发计划(2023YFD1800800);; 甘肃省重大农业科技项目(24ZDNA001);; 农业科技创新计划(25-LZIHPS-06);; 武威科技重大专项计划项目(WW24A01ZDN001)
