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作者：王敏;温渊;曹钰莹;刘聪;李超;汤芳;戴建君;薛峰;
单位：南京农业大学动物健康与食品安全国际合作联合实验室;中国动物卫生与流行病学中心/农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方)/青岛市动物生物安全重点实验室;中国药科大学生命科学与技术学院;
摘要：旨在探索牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)ORF140在病毒感染宿主细胞中的作用。利用前期构建的LSDV ORF140缺失株，荧光定量分析缺失ORF140基因在LSDV感染宿主细胞后细胞因子转录水平的变化，同时选取LSDV保守基因ORF077建立检测LSDV ORF077的标准曲线，检测LSDV ORF140缺失株与野毒株在不同时间点的拷贝数变化，然后通过蛋白质谱技术和免疫共沉淀技术分析140蛋白与宿主细胞内存在相互作用的蛋白，最后敲低此蛋白的基因转录水平检测宿主细胞内细胞因子转录水平的变化。结果：LSDV ORF140缺失株会引起宿主细胞β-catenin基因转录水平显著下调(P<0.000 1)且缺失株拷贝数始终比野毒株高，推测LSDV ORF140基因的存在能激活宿主细胞的Wnt/β-catenin(Wnt/β-连环蛋白信号通路)信号通路，并且该通路的激活会影响LSDV的复制，宿主细胞中的连接斑珠蛋白(JUP)与LSDV 140蛋白存在相互作用，敲低宿主细胞JUP基因转录水平，发现β-catenin基因转录水平下调(P<0.05),感染LSDV后，β-catenin基因转录水平仍处于下调状态，并且检测到此时病毒拷贝数比野毒株高(P<0.05),以此推测LSDV ORF140是通过与JUP结合激活Wnt/β-catenin信号通路，从而影响LSDV的复制。综上，本研究证实LSDV 140蛋白能够与宿主细胞中的JUP蛋白结合，激活Wnt/β-catenin信号通路，从而抑制LSDV的复制，为揭示LSDV与宿主之间的相互作用及LSDV的致病机制提供参考。
关键词：牛结节性皮肤病病毒;连接斑珠蛋白;Wnt/β-catenin信号通路;病毒复制
基金资助：国家重点研发项目(2021YFD1800500)
