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作者：陈东奇;郑殿重;魏志颖;王莹;李佳璇;崔文;姜艳平;王晓娜;周晗;王丽;乔薪瑗;李一经;唐丽杰;单智夫;
单位：东北农业大学动物医学学院;黑龙江省农业科学院畜牧所;
摘要：猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域，本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中，经IPTG诱导并纯化后，所得蛋白用于小鼠免疫，制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达，通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果：Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达，并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10 240的多克隆抗体，该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力；免疫荧光及Western blot结果表明，Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达，且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上，本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体，验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达，为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。
关键词：猪流行性腹泻病毒;Nsp6基因;多克隆抗体;分段表达;真核表达
基金资助：黑龙江省自然科学基金项目(LH2021C042); 东北农业大学“青年才俊”项目(20QC19)
