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作者：杜小正;刘莉梅;刘翠;井维尧;袁博;张星华;张枫帆;李向军;刘强;王海东;
单位：甘肃中医药大学针灸推拿学院;甘肃中医药大学附属医院;甘肃省中医院;
摘要：目的：观察热补针法对类风湿性关节炎（RA）寒证模型家兔滑膜组织中长链非编码RNA(LncRNA)表达谱的影响，探讨热补针法治疗RA的作用机制。方法：将18只家兔随机分为正常组、模型组、热补针法组，每组6只。采用卵蛋白联合弗氏完全佐剂混合溶液注射，配合低温冷冻法构建RA寒证模型。热补针法组予以热补针法针刺双侧“足三里”，留针30 min/次，1次/d，共14 d。干预结束后观察家兔一般情况，测定膝关节周径、痛阈值；以膝关节彩色多普勒超声观察关节腔积液、滑膜厚度及内部血流信号；以HE染色法观察滑膜病理形态学变化；以ELISA法检测各组家兔血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素（IL）1β及IL-6含量；以高通量测序技术检测并分析家兔滑膜组织中差异LncRNA及生物学功能；以实时荧光定量PCR法验证5个显著差异LncRNA的表达水平。结果：与正常组比较，模型组家兔膝关节周径增加（P<0.05），痛阈值降低（P<0.05），滑膜弥漫性增生、关节腔积液及异常血流信号明显，滑膜衬里增生、变厚，衬里下可见毛细血管生成，大量炎性细胞簇集，血清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高（P<0.05）。与模型组比较，热补针法组家兔膝关节周径缩小（P<0.05），痛阈值升高（P<0.05），滑膜弥漫性增生、关节腔积液及异常血流信号均有不同程度减轻，滑膜衬里增生明显减少，可见少量炎性细胞簇集，血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量降低（P<0.05）。高通量测序和生物信息分析结果显示，热补针法组和模型组共有142个LncRNAs有相反的表达趋势，其中有59个LncRNA被逆向上调，主要表现为代谢途径、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）信号通路和AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）信号通路为核心的功能聚类；有83个LncRNA被逆向下调，主要表现为细胞周期、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路和细胞衰老为核心的功能聚类。PCR验证结果显示，与正常组比较，模型组家兔膝关节滑膜组织中MSTRG.15448.1和MSTRG.17571.1表达水平降低（P<0.05）,MSTRG.5134.1、MSTRG.13294.1和MSTRG.15972.1表达水平升高（P<0.05）；与模型组比较，热补针法组家兔膝关节滑膜组织中MSTRG. 15448.1和MSTRG. 17571.1表达水平升高（P<0.05）,MSTRG.5134.1、MSTRG.13294.1和MSTRG.15972.1表达水平降低（P<0.05）。结论：热补针法能够调节RA滑膜组织中LncRNA表达谱的变化，这可能是其抑制滑膜炎性反应、改善症状的机制之一。
关键词：类风湿性关节炎;;热补针法;;长链非编码RNA
基金资助：国家中医药管理局甘肃郑氏针法学术流派传承工作室项目（No.2305135901）;; 国家自然科学基金项目（No.82060891）;; 甘肃省自然科学基金项目（No.22JR11RA198、22JR11RA201）;; 甘肃省青年科技基金计划项目（No.23JRRA1686）
