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作者：赵金鹏;向小华;张喜峰;杜林林;孙炳剑;汪敏;孙航军;
单位：河南农业大学植物保护学院;中国烟草总公司海南省烟草公司海口雪茄研究所;陕西省烟草公司宝鸡市公司;
摘要：【目的】明确影响马铃薯Y病毒属病毒6K2蛋白叶绿体定位的结构域。【方法】6K2蛋白分为N端结构域、中间跨膜结构域与C端结构域，分别将6K2蛋白N段结构域、跨膜结构域、C段结构域缺失突变，构建6K2~(PVYΔN)、6K2~(PVYΔC)、6K2~(PVYΔNΔC)、6K2~(TuMVΔN)、6K2~(TuMVΔC)、6K2~(TuMVΔNΔC)突变体。将6K2~(PVY)与6K2~(TuMV)跨膜区的GxxxG基序分别突变，构建6K2~(PVY GV)、6K2~(TuMV GV)突变体，通过激光共聚焦显微镜观察不同6K2-RFP突变体亚细胞定位。将PVY与TuMV编码的6K2蛋白不同结构域重组，构建6K2~(PPT)、6K2~(PTT)、6K2~(TPT)、6K2~(TTP)、6K2~(TPP)、6K2~(PTP)重组蛋白，观察不同6K2-RFP重组蛋白的亚细胞定位。【结果】6K2~(TuMV),突变体6K2~(TuMVΔN)、6K2~(TuMVΔC)、6K2~(TuMVΔNΔC)、6K2~(PVYΔC)、6K2~(PVYΔNΔC),重组蛋白6K2~(PPT)、6K2~(PTT)、6K2~(TPT)定位于叶绿体。6K2~(PVY),突变体6K2~(PVYΔN),重组蛋白6K2~(TTP)、6K2~(TPP)、6K2~(PTP)不定位于叶绿体。【结论】马铃薯Y病毒属病毒6K2蛋白的跨膜结构域决定其叶绿体定位，而6K2~(PVY)的C端结构域干扰其叶绿体定位，6K2~(PVY)与6K2~(TuMV)的C端结构域的差异导致了其不同亚细胞定位。
关键词：马铃薯Y病毒属;6K2蛋白;叶绿体;跨膜结构域;亚细胞定位
基金资助：中国烟草总公司海南省公司科技项目(2023002);中国烟草总公司陕西省公司科技项目(KJ-2023-05)
