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作者：董伟波;陈悦兰;王燚;程梦;魏伟;常艳;
单位：安徽医科大学临床药理研究所,抗炎免疫药物教育部重点实验室,安徽省抗炎免疫药物协同创新中心,安徽医科大学类风湿关节炎研究中心;
摘要：目的 构建巨噬细胞特异性色氨酸2,3-双加氧酶(TDO2)基因敲除小鼠，为研究TDO2调控巨噬细胞功能影响疾病发生发展提供动物模型。方法 基于Cre-Loxp系统构建巨噬细胞特异性TDO2基因敲除(TDO2~(flox/flox)Lyz2-iCre~+)小鼠。采用PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型；采用Western blot和免疫荧光验证小鼠巨噬细胞中TDO2敲除效果；通过苏木精-伊红(HE)染色，观察主要组织器官是否存在自发病变。结果 基因型鉴定结果表明，flox扩增产物长度在407 bp或408 bp处仅有一条条带且Cre扩增产物长度在543 bp处有一条条带的小鼠即为TDO2~(flox/flox)Lyz2-iCre~+小鼠。Western blot结果显示，与TDO2~(flox/flox)小鼠相比，TDO2~(flox/flox)Lyz2-iCre~+小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)中TDO2表达降低(P<0.01)。免疫荧光结果显示，与TDO2~(flox/flox)小鼠相比，TDO2~(flox/flox)Lyz2-iCre~+小鼠腹腔巨噬细胞和BMDMs中TDO2表达降低。HE染色结果显示，与TDO2~(flox/flox)小鼠相比，TDO2~(flox/flox)Lyz2-iCre~+小鼠肝脏、脑、肾脏和脾脏组织内细胞形态无明显差异。结论 成功构建TDO2~(flox/flox)Lyz2-iCre~+小鼠，为后续深入研究TDO2调控巨噬细胞活化在疾病中的作用和机制提供更加精准的实验动物模型。
关键词：TDO2;特异性基因敲除;巨噬细胞;基因型鉴定;Cre-loxP
基金资助：安徽省自然科学基金面上项目(编号：2108085MH320); 省留学人员创新项目择优资助计划项目(编号：2022LCX019)
