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作者：何静;禚鑫喆;邹欣雨;王梦凡;王秀云;
单位：安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室;
摘要：目的 构建小鼠组织蛋白酶K(CTSK)基因的敲降重组腺相关病毒(AAV-shCTSK),检测AAV-shCTSK在小鼠体内的敲降效率，及其对脂肪组织脂质储存的影响。方法 设计阴性对照组(NC)及CTSK的shRNA引物，退火后插入到骨架载体中，挑选克隆并测序鉴定，重组质粒经纯化后，利用转染试剂PEI将构建好的腺相关病毒载体、包装质粒和辅助质粒共转染到293T细胞中，进行腺相关病毒包装与扩增，得到AAV-shNC以及AAV-shCTSK。利用脂肪组织原位注射将AAV病毒注射入小鼠附睾脂肪组织，2周后免疫印迹实验检测小鼠脂肪组织中CTSK蛋白的表达量及HE染色检测脂肪组织中脂滴大小。结果 成功获得AAV-shNC以及AAV-shCTSK腺相关病毒。原位注射AAV-shCTSK的小鼠脂肪组织中CTSK成功敲降，脂肪组织中白色脂肪细胞显著变小。结论 小鼠CTSK的敲降腺相关病毒构建成功，脂肪组织CTSK敲降引起脂肪组织中脂质含量减少。
关键词：CTSK;腺相关病毒;脂肪组织原位注射
基金资助：国家自然科学基金青年项目(编号：82300659); 安徽省自然科学基金青年项目(编号：2308085QH247); 安徽医科大学校科研基金青年项目(编号：2021xkj006); 安徽高校自然科学研究项目重点项目(编号：KJ2021A0220)
