来源：期刊VIP网 时间：
作者：王婉婷;刘文韬;赵瑞;孟凡亮;孙迪;魏销玥;袁雪珍;宫雅楠;范佳铭;龙丽瑾;赵雅坤;陈建伶;张建中;闫笑梅;
单位：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室;北知禾新创生物技术有限公司;中国医科大学;
摘要：目的 本研究拟构建超大容量天然噬菌体纳米抗体库，用于传染病诊断和治疗用的抗体筛选。方法 选取1只健康羊驼的脾脏和100只健康羊驼的外周血，提取总RNA并反转录合成cDNA。通过两次聚合酶链反应（PCR）扩增羊驼重链抗体可变区片段，将酶切纯化扩增产物与载体pSCD-2连接，电转化大肠埃希菌TG1感受态细胞，构建噬菌体纳米抗体展示文库。并对抗体库转化阳性插入率、纳米抗体序列以及抗体库污染情况进行检测和分析。结果 成功构建累计库容量达1.165×10~(12)的天然纳米抗体细胞库，噬菌体展示库滴度>10~(13)每毫升菌落形成单位（CFU/mL）。抗体库转化阳性插入率为98.33%(177/180)。随机选取125个PCR鉴定阳性克隆测序，纳米抗体序列均为独特序列。纳米抗体的互补决定区3的氨基酸长度为6～26个氨基酸，呈正态分布，氨基酸序列存在较大差异。细胞抗体库和噬菌体展示抗体库均无烈性噬菌体污染。结论 本研究成功构建了超大容量天然纳米抗体库，该抗体库多样性良好，为后续从中筛选出具有应用价值的特异性的纳米抗体奠定了基础。
关键词：天然抗体库;;纳米抗体;;噬菌体展示技术
基金资助：首都卫生发展科研专项（No.2024-2G-4363）;; 国家自然科学基金面上项目（No.81873959）;; 财政专项基金（No.102393240020020000003）~~
