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作者：杨露瑶;任小东;毛怡心;李梦洁;车艳晴;刘晓;孙志文;白雪梅;高鹤;刘小宁;王多春;
单位：兰州大学公共卫生学院;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室;中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所,传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室,中国疾病预防控制中心环境与人群健康重点实验室;
摘要：目的 建立一种检测6种常见食源性病原微生物的多重定量聚合酶链式反应（qPCR）方法。方法 设计针对6种常见食源性病原体（单核增生李斯特菌、沙门菌、副溶血弧菌、诺如病毒、大肠埃希菌O157:H7、金黄色葡萄球菌）的特异性引物及多重qPCR探针，优化引物、探针序列及反应体系以建立多重qPCR方法。对该方法进行标准曲线和检测限分析、特异性与抗干扰试验，并检测模拟样品以评价其适用性。结果 本研究建立了六重两体系的qPCR检测方法，每个体系可检测3种病原体，两个体系中的最低检测限均为10拷贝/μL，相关系数R~2均>0.99,P值均<0.001。6种目标病原体均出现对应扩增曲线，而非目标病原体均未出现，能够实现特异性检测。同时，当检测体系中出现≥2种不同浓度的目标病原体时，相互之间无干扰和抑制现象。模拟样品检测显示，该多重qPCR方法能够特异性对6种目标病原体进行检测。结论 本研究建立了一种灵敏度高、特异性强的多重qPCR方法，可用于快速检测6种常见的食源性病原体。
关键词：食源性病原微生物;;多重定量聚合酶链式反应;;检测方法
基金资助：国家科技基础资源调查专项（No.2021FY100904）;; 病原菌指纹图谱构建（No.KFYJ-2022-039）~~
